菜豆细菌性萎蔫病菌检测方法 征求意见稿.docVIP

ICS FORMTEXT FORMTEXT 点击此处添加中国标准文献分类号 FORMTEXT FORMTEXT 中华人民共和国 FORMTEXT 行业标准 FORMTEXT XX/T FORMTEXT XXXXX— FORMTEXT XXXX FORMTEXT FORMTEXT 菜豆萎蔫病菌检疫鉴定方法 FORMTEXT Detection and Identification of Curtobacterium flaccumfaciens pv.flaccumfaciens FORMTEXT 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 FORMDROPDOWN FORMTEXT FORMTEXT XXXX - FORMTEXT XX - FORMTEXT XX发布 FORMTEXT XXXX - FORMTEXT XX - FORMTEXT XX实施 FORMTEXT 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 XX/T XXXXX—XXXX PAGE \* MERGEFORMAT 8 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准主要起草单位：中华人民共和国北京出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：种焱、高文娜、卢广、宁跃明、赵汗青。 本标准系首次发布的出入境检验检验行业标准。 本标准附录为资料性附录。 菜豆萎蔫病菌检疫鉴定方法 范围 本标准确立了菜豆属（Phaseolus L.）植物上菜豆萎蔫病菌（Curtobacterium flaccumfaciens pv.flaccumfaciens）的检疫和鉴定方法。以寄主植物上的症状特征、病原菌的生理生化特征和分子生物学检测方法等为依据，规定了检测试剂及仪器用具、实验室检疫鉴定以及样品保存方法。 本标准适用于对来自菜豆属植物疫区的菜豆萎蔫病菌的检疫。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T 1538.1 培养基制备指南 第1部分：实验室培养基制备质量保证通则 SN/T 1809 进出境植物种子检疫规程 SN/T 2122 进出境植物及植物产品检疫抽样 原理 分类学地位 英文名：Bacterial vascular wilt of beans 学名：Curtobacterium flaccumfaciens pv.flaccumfaciens 异名：Bacterium flaccumfaciens Hdges;Corynebacterium flaccumfaciens ;Phyto-monas flaccumfaciens ;Corynebacterium flaccumfaciens pv.flaccumfaciens;Corynebacterium flaccumfaciens subsp. Flaccumfaciens 原核生物界(Procaryotes)，厚壁菌门(Firmicutes)，厚壁细菌纲 (Firmibacteria)，短小杆菌属(Curtobacterium)。 鉴定原理 以寄主植物上的症状特征、生理生化测试、常规PCR检测方法对菜豆萎蔫病菌进行检疫鉴定。 仪器用具和试剂 仪器用具 低速离心机、PCR仪、凝胶电泳仪、凝胶成像系统、低温冰箱(-80℃)、普通冰箱、恒温水浴锅电热干燥箱、高压灭菌器、电子天平、超净工作台、紫外分光光度计、破碎仪、可调微量加样器(5 uL～1000 uL)、培养皿(直径9 cm)、三角烧瓶(250 mL)、Eppendorf 管（0.2 mL-2 mL）、刻度离心管(10 mL或20 mL) 试剂 葡萄糖、甘油、蛋白胨、营养琼脂、琼脂糖、琼脂、焦磷酸钠盐、蒸馏水、MgSO4·7H2O、K2HPO4、dNTP、TaqDNA聚合酶、DNA分子量Marker、常规PCR引物CffF1/CffR2。 相关试剂及培养基的配制参见附录B。 现场抽样 按照SN/T 1809-2006及SN/T 2122-2008规定进行取样。 实验室检疫 症状检查 种子症状观察 菜豆萎蔫病菌存在于大豆和菜豆种子内外部。系统侵染的种子在种皮下有一层细菌层，呈亮黄色；表面侵染的种子仅在种脐有一点黄色细菌粘液，一旦发现异常种子需进行隔离种植或间接分离病菌。 植株症状观察 待种植于隔离温室或隔离场地的种子长出幼苗后，对其表现进行系统观察，主要观察出苗情况，植株和叶片有无异常表现及豆荚上有误异常等，一旦发现异常植株需直接进行分离病菌。 病菌分离、测定 直接分离 首先，切取病株变色维管束浸于无菌水中镜检。若有大量