河北省2011年衡水生物一轮复习课件：细胞肌细胞工程 实验一生物组织中还原糖脂肪蛋白质的鉴定.pptxVIP

【实验原理】;【用品分析】 1．实验材料的选择;●特●别●提●醒 ①鉴定还原糖时，选择白色材料能排除实验材料自身颜色对颜色反应的影响。 ②鉴定脂肪时一般不选择蓖麻，因为其虽含脂肪较多，但有坚硬的外壳，不易除去，很难制作切片。 ③使用蛋清时若不稀释，则实验后会粘在试管壁上，使反应不彻底，试管不易洗刷。 ;　2.试剂使用的注意事项 (1)斐林试剂很不稳定，故应将组成斐林试剂的甲液(0.1 g/mL的NaOH溶液)和乙液(0.05 g/mL的CuSO4溶液)分别配制、储存，使用时再临时配制。 (2)苏丹Ⅲ染液的染色时间为2 min～3 min，苏丹Ⅳ染液的染色时间为1 min，时间不能太长。 (3)双缩脲试剂的使用，应先加试剂A(0.1 g/mL的NaOH溶液)，造成碱性环境，再加试剂B(0.01 g/mL的CuSO4溶液)。;【实验步骤】 1．还原糖的鉴定 选材：含糖(还原糖)量较高，白色或近于白色的植物组织;结论：生物组织中含有还原糖;2．脂肪的鉴定;3．蛋白质的鉴定 选材与制备组织样液：卵清稀释液或大豆研磨液(或豆浆);【思考乐园】 1．在做可溶性还原糖与蛋白质鉴定的实验时，在鉴定前，为什么要留出一部分样液？ 虽然本实验是验证性实验，但也要注意对照。在鉴定可溶性还原糖和蛋白质时留出一部分样液，以便与鉴定后的样液的颜色变化作对照，这样可以增强说服力。 2．为什么蛋白质要稀释？ 制备蛋白质稀释液，主要防止蛋白质与双缩脲反应后粘固在试管壁上，使反应不彻底，也不易洗刷试管。;3．斐林试剂与双缩脲试剂都由NaOH和CuSO4组成，两者有何不同？ 有如下3点不同： ①溶液浓度不同 斐林试剂由质量浓度为0.1g/mL NaOH溶液和质量浓度为0.05g/mL CuSO4溶液配制而成，双缩脲试剂的成分是质量浓度为0.1g/mL NaOH溶液与质量浓度为0.01g/mL CuSO4溶液。;②使用原理不同 斐林试剂实质是新配制的一定浓度的Cu(OH)2溶液，在加热条件下，与加入的葡萄糖(可溶性还原糖，分子内部含有还原性半缩醛羟基，)能够生成砖红色的Cu2O沉淀，而葡萄糖本身氧化成葡萄糖酸。 双缩脲试剂实质是在碱性环境下的Cu2＋与双缩脲(H2NOC—NH—CONH2)作用，形成紫色或紫红色的络合物。;③使用方法不同 斐林试剂使用时，先把NaOH溶液和CuSO4溶液混合，而后立即使用。 双缩脲试剂使用时，先加NaOH溶液，然后加入CuSO4溶液。;4．反应过程中，出现的颜色变化及原因分别是什么？ ①用斐林试剂鉴定还原糖的实验 因先加入刚配制的Cu(OH)2溶液，故溶液变成浅蓝色；加热后，部分Cu(OH)2被还原成砖红色的Cu2O沉淀，二者混合故呈现棕色；随着反应的继续进行，Cu(OH)2被全部还原成Cu2O，故而出现砖红色沉淀。颜色变化： 浅蓝色→棕色→砖红色(沉淀);②双缩脲试剂鉴定蛋白质实验 加入双缩脲试剂A，溶液为无色；加入双缩脲试剂B，因有Cu(OH)2生成，故呈现浅蓝色；振荡均匀后，由于反应的进行，出现紫色的络合物。颜色变化：无色→浅蓝色→紫色;5．斐林试剂为何要现配现用？用斐林试剂鉴定时，为何不能先加入NaOH，后加入CuSO4，而必须混合后再加入？ 因斐林试剂很不稳定，容易生成蓝色的Cu(OH)2沉淀，所以应将甲液与乙液分别配制储存，使用时再临时配制。 若先加入NaOH，还原性糖中的还原性半缩醛羟基易被氧化而失去还原性，再加入CuSO4后不能产生砖红色的Cu2O沉淀，只有将其先配制成Cu(OH)2溶液，才能产生砖红色的沉淀。;6．为何在该实验中，一般不选用双子叶植物的叶片和单子叶植物的叶片？ 在双子叶植物中，光合作用的主要产物葡萄糖形成后合成淀粉，暂时储存在叶片内，因此最好不选用双子叶植物的叶片作实验材料；在单子叶植物如韭菜、鸢尾，并不将光合作用的初始产物转变为淀粉，因此叶内含有大量的可溶性还原糖，但是，由于叶片中叶绿素的颜色较深，对于鉴定时的颜色反应起到掩盖作用，导致实验现象不明显，因此也不选用单子叶植物的叶片。;7．在使用双缩脲试剂时，为什么要先加入试剂A，后加入试剂B？加入试剂A后，为什么只能加入3滴～4滴双缩脲试剂B，而不能加入过量？ 先加入试剂A，造成碱性环境，而只有在碱性环境中，蛋白质才容易与Cu2＋发生颜色反应。 因为若加入过量的双缩脲试剂B，CuSO4在碱性溶液中生成大量的蓝色Cu(OH)2沉淀，会遮蔽实验中所产生的紫色，影响观察的结果。;一、实验中的注意事项 1．对试管中的溶液进行加热时，试管底部不要触及烧杯底部，另外，试管口不要朝向人，以免沸腾的溶液冲出试管，造成烫伤。 2．在提取液与斐林试剂混合后，为缩短时间，实验前将烧杯内的水煮沸备用。 3．鉴定还原糖和蛋白质时，在鉴定之前可以留出一部分样液，以便与鉴定后样液的