里氏木霉液体发酵法生产纤维素酶gkljy8y5.docxVIP

余晓斌具润漠(无锡轻工大学生物工程学院, 无锡, 214036)(韩国仁荷大学 生物工学科)摘 要通过比较几株霉菌产纤维素 余晓斌 具润漠 (无锡轻工大学生物工程学院, 无锡, 214036) (韩国仁荷大学 生物工学科) 摘 要 通过比较几株霉菌产纤维素酶活力, 发现里氏木霉 R u t C - 30 活力最高; 采用A v ice l 与 麸皮复合碳源, 以及使用 KH 2PO 4 - K 2H PO 4 缓冲系统控制发酵液 pH , 28℃摇瓶发酵 6d, 最高酶活 达到 CM C a se 100- 125U /m l, F PA 9- 12U /m l。采用 2. 5 升发酵罐培养, 通过控制 pH 和溶氧, 纤 维素酶活力为CM C a se 133. 4U /m l, F PA 11. 67U /m l。用硫铵盐析法提取制得纤维素酶干粉, 其活 力为 CM C a se3074. 9U /g, F PA 166. 7U /g。 关键词 里氏木霉 CM C a se F PA Β- 葡萄糖苷酶 纤维素酶是降解纤维素生成葡萄糖的一 组酶的总称, 其最大的潜在用途是把纤维素 类物质酶法水解成葡萄糖, 葡萄糖可用于生 产燃料酒精、食品和各种化学品, 此外近年来 发现纤维素酶在众多的工业领域具有广泛的 应用价值, 如食品、饲料、医药、纺织、洗涤剂 和造纸工业1 等。 国外对纤维素酶有近 40 年多年的广泛 研究, 纤维素酶产生菌代表性菌株有木霉、青 1. 1 菌种 里氏木霉 ( T rich od e rm a reese i ) R u t C - 30 ( 简写为 R u t C - 30) , 里氏木霉 QM 9414 (QM 9414) , 里氏木霉 QM 9414 的紫外线诱 变株 (QM - m ) , 黑曲霉 (A sp e rg il lu s n ig e r ) 6 (A sp 6)。 - 1. 2 培养基 1. 2. 1 斜面培养基 土豆 PDA 斜面, 30℃培养 6d 后使用。 1. 2. 2 发酵培养基 摇瓶发酵培养基: 蛋白胨 0. 3% , 硫铵 0. 2% , 酵 母 膏 0. 05% , KH 2 PO 4 0. 4% , 霉和曲霉等, 其中里氏木霉 R u t C - 30 被认 为是最好的纤维素酶产生菌之一2 ; 我国对 纤维素酶的研究和生产也已开展了广泛的研 究, 但大多采用固体发酵方式3, 4 , 对液体 发酵生产纤维素酶的研究报道尚不多见, 固 体发酵虽有许多优越之处, 但仍有发酵水平 不稳定, 不适于大规模生产等弊端, 因此对纤 维素酶液体深层发酵的研究很有意义。 高活 力纤维素酶通常是在发酵罐中通过分批发酵 或流加发酵获得的5, 6 , 但对在实验室摇瓶条 件下如何获得高活力酶活及酶的提取, 国内 外文献报道均不多见。 本论文对摇瓶条件下 如何获得高活力的纤维素酶活进行了研究, 使用 2. 5 升发酵罐进行了初步上罐试验, 并 进行了酶的提取。 C a2C l2 ·2H 2O 03% , Tw een - 同碳源添加后, M gSO 4 · 7H 2O 0. 03% , 0. 80 0. 02% 为基础培养基, 不 121℃灭菌 20m in 后使用。 2. 5 升发酵罐培养基: A v ice l 3% , 麸皮 1% , 蛋白胨 0. 3% , 硫铵 0. 2% , 酵母膏 0. 05% , KH 2 PO 4 0. 3% , C a2C l2 · 2H 2O 0. M gSO 4 ·7H 2O 03% , 0. 03% , Tw een - 80 0. 02% , 消泡剂 (A n t ifo am 204 S igm a Co. ) 适 量。 1. 3 发酵方法 摇瓶发酵, 采用生理盐水斜面孢子悬 液, 按 10% 种 量 接 种 至 50m l 培 养 液 中, 250m l 三角瓶, 28℃旋转摇床 150 rpm 培养 6d。 1 材料与方法 α 收稿时间: 1997- 09- 11, 改回时间: 1997- 10- 15 第 24 卷第 1 期余晓斌等: 里氏木霉液体发酵法生产纤维素酶212. 5 升罐 (K F - 2. 5L ,水杨素溶液 (溶于 pH 4. 8 第 24 卷 第 1 期 余晓斌等: 里氏木霉液体发酵法生产纤维素酶 21 2. 5 升罐 (K F - 2. 5L , 水杨素溶液 (溶于 pH 4. 8 0. 1M HA c- N aA c 缓冲液) , 50℃反应 30m i