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樟芝适宜液体发酵培养基配方研究 　　摘要：研究了珍贵药用菌――樟芝（Antrodia camphorata）液体发酵适宜的碳源、氮源、碳氮比及其所需的矿质元素、微量元素、维生素。结果表明：樟芝菌丝生长的最适无机氮源为酒石酸铵；最适有机氮源为麸皮；最适天然碳源为米粉，且以天然多糖类物质（木薯粉除外）为碳源处理的菌丝产量明显高于单糖、双糖、化学制剂多糖处理，而葡萄糖是仅次于天然多糖类物质的碳源；菌丝生长适宜的碳氮比为（20～50） ∶ 1；K、P、Mg、S、Na、Ca均为菌丝生长必需的矿质元素；微量元素Fe、B、Zn、Mn、Mo、Cu、Co均对樟芝菌丝生长有一定抑制作用，其中Fe、B元素的抑制作用最显著；添加维生素对菌丝生长无显著影响。 　　关键词：樟芝；菌丝体；液体发酵；培养基配方 　　中图分类号： S188+.4 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2016）07-0236-03 　　樟芝（Antrodia camphorata）属于多孔菌科、薄孔菌属[1]，别称牛樟菇、牛樟芝、樟内菇、红樟菰等，为中国台湾特有的珍贵药用真菌[2]。樟芝仅寄生在台湾特有树种牛樟（Cinnamomum comphora）的树干上[3]，具有抗肿瘤、增加免疫力、抗菌、抗病毒、抗过敏、抗高血压、降血糖、降胆固醇、抑制血小板凝集及保护肝脏等生理功能[4]。目前野生樟芝数量很少，而且尚未能进行其子实体的人工栽培，所以采用液体发酵培养樟芝的菌丝体是最环保的樟芝获取途径，并且菌丝体的效果接近子实体[5]。刘华等研究了樟芝液体发酵培养条件，采用的培养基配方为40 g/L葡萄糖、6 g/L豆饼粉、1 g/L K2HPO4、100 mg/L 维生素B1，pH值自然，接种量为20%，装液量为100 mL/250 mL三角瓶，转速100 r/min，26 ℃恒温培养6 d后，胞内的三萜产量达 152.5 mg/L[6]。黄大斌等在电子显微镜下观察了樟芝的菌丝体、子实体、分生孢子，并在琼脂培养基上研究了不同碳源、氮源对樟芝菌丝生长的影响，结果发现樟芝菌丝生长最适温度为28 ℃，木屑培养基的最适含水量为58.5%，最适碳源为2%葡萄糖，最适氮源为0.2%柠檬酸铵[7]。黄志伟等对樟芝菌丝体的固体培养特性进行了研究，结果表明以杂木屑、麦皮（或稻草粉）为主料的培养基均可培养出生长良好的樟芝菌丝，菌丝生长适宜的PDA 培养基pH 值为4～8，在木屑培养基中添加3%～5%的过磷酸钙可促进菌丝生长，光照和黑暗条件下菌丝的生长速度没有显著差异，但在黑暗条件下菌丝长势较好，分生孢子较多[8]。宋爱荣对樟芝液体培养的碳源、氮源分别进行了研究，结果表明碳源以麦芽糖利用效果最佳，有机氮比无机氮的利用效果更好，其中以酵母膏最佳[9-10]。陈娟等以樟芝菌丝生物量、三萜、多糖为响应指标，利用Plackett-Burman法筛选樟芝液态发酵培养基碳源、氮源，结果显示，最有利于提高樟芝菌丝生物量的碳源、氮源为葡萄糖、可溶性淀粉、酵母粉，最有利于提高樟芝多糖含量的碳源、氮源为可溶性淀粉、麸皮，而最有利于提高樟芝三萜含量的碳源为麦芽糖[11]。凌庆枝等研究表明，樟芝对不同无机盐离子需求不同，对钾盐需求量大，对钠盐、铁盐、镁盐、铜盐需求量少[12]。本研究探讨了适宜樟芝液体发酵的碳源、氮源、碳氮比及其所需的矿质元素和微量元素等，以期为深入研究樟芝的液体发酵工程技术奠定基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 供试菌株 樟芝菌株Ac-A，由福建农林大学菌物研究中心提供。 　　1.1.2 供试培养基配方 　　1.1.2.1 研究不同氮源对樟芝菌丝生长影响的培养基配方 基础培养基配方：3%葡萄糖、0.1% KH2PO4、0.05% MgSO4?7H2O、5 mg/L 维生素B1，pH值自然。添加的无机氮种类为硫酸铵、氯化铵、磷酸氢二铵、酒石酸铵、硝酸钾、硝酸钠、硝酸钙、硝酸铵；有机氮种类为蛋白胨、大豆粉、麸皮、玉米粉。氮源添加量为0.032 g N/100 mL无机氮、0.2%蛋白胨、5%天然有机氮。 　　1.1.2.2 研究不同碳源对樟芝菌丝生长影响的培养基配方 基础培养基配方：0.032%（以氮含量计算）酒石酸铵、0.1% KH2PO4、0.05% MgSO4?7H2O、5 mg/L维生素B1、pH值自然。添加的碳源种类为葡萄糖、果糖、木糖、半乳糖、阿拉伯糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇、可溶性淀粉、微晶纤维素、玉米粉、面粉、米粉、甘薯粉、木薯粉。碳源添加量为2%。 　　1.1.2.3 研究不同碳氮比对樟芝菌丝生长影响的培养基配方 基础培养基配方：2%葡萄糖、0.1% KH2PO4、0.05% MgSO4?7H2O、5 mg/L 维生素B1，pH值自然。分别在