酶改性磷脂中1-和2-溶血磷脂酰胆碱的测定 高效液相色谱法（国家标准征求意见稿）.docVIP

前 言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由国家粮食局提出。 本标准由全国粮油标准化技术委员会归口。 本标准负责起草单位：江南大学 本标准参与起草单位： 本标准起草人：王兴国、金青哲、单良、刘元法、宋志华、潘秋琴 本标准为首次发布。 酶改性磷脂中1-和2-溶血磷脂酰胆碱的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了酶改性磷脂产品中1-溶血磷脂酰胆碱（1-acly lysophosphatidylcholine, 1- LPC）和2-溶血磷脂酰胆碱（2- acly lysophosphatidylcholine, 2- LPC）的高效液相色谱测定方法。 本方法适用来源于大豆、蛋黄、菜籽的酶改性溶血磷脂酰胆碱的测定。 2 规范性引用文件 下列标准中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法（GB/T 6682—1992，neq ISO 3696:1987） 3 原理 酶改性磷脂产品中的1-和2-溶血磷脂酰胆碱与磷脂酰胆碱（PC）等其它成分用高效液相色谱分离，采用示差折光检测器检测，外标法定量。 4 试剂 以下所用的试剂，除特殊注明外，均为分析纯试剂；水为符合GB/T 6682 规定的一级水。 4.1　95%乙醇。 4.2 草酸·2H2O。 4.3 草酸溶液（0.02 moL/L）：准确称取1.261 g草酸（4.2），加水溶解并稀释至500 mL。 4.4 磷脂标准品：磷脂酰胆碱（PC）、1-溶血磷脂酰胆碱（1- LPC）、2-溶血磷脂酰胆碱（2- LPC），sigma公司。 5 仪器 5.1 高效液相色谱仪（配折光检测器）。 5.2 高速离心机。 5.4 超声波清洗仪。 5.3 纤维膜（0.45 μm）。 6 样品处理 称取50 mg～100 mg酶改性磷脂样品，用95%乙醇溶解稀释至25 mL，用高速离心机（5.2）离心，取上清液用0.45 μm膜（5.3）过滤，现配现用。 7 测定 7.1 色谱条件 色谱柱：氨基柱，250 mm×4.6 mm，粒径5 μm，或相当者。 流动相：95%乙醇（4.1）：草酸溶液（4.3）=92：8（v/v），过0.45 μm纤维膜（5.3），并经过脱气处理。 流速：1 mL/min。 柱温：25℃。 进样量：10 μL。 7.2 标准曲线 分别准确称取适量预先经五氧化二磷干燥2天的磷脂酰胆碱、1-溶血磷脂酰胆碱、2-溶血磷脂酰胆碱标准品，用95%乙醇（4.1）溶解、稀释，配置一系列浓度的标准溶液，标准溶液中各磷脂组分的浓度在0.05 mmoL/L～2.5 mmoL/L范围内，现配现用。 用微量进样器准确注入10 μL现配的各浓度标准溶液于高效液相色谱仪（5.1）中，记录峰面积，以峰面积对进样量绘制标准曲线。 标准品的色谱图见附录A。 注1：配制好的标准溶液应在12小时内完成测定。 7.3 色谱测定 用微量进样器准确注入10 μL现配的L样品液于高效液相色谱仪（5.1）中，按照上述色谱条件进行色谱分析，记录峰面积，样品液浓度高时适当稀释，使响应值均在仪器检测的线性范围内，根据保留时间定性，外标法定量。 注2：配制好的样品液应在12小时内完成测定。 8 结果 8.1 计算 样品中1-或2-溶血磷脂酰胆碱的含量按（1）式计算： …………………………………(1) 式中： ——样品中1-或2-溶血磷脂酰胆碱的含量，单位为质量分数（%）； ——由外标法测得的样品中1-和2-磷脂酰胆碱的摩尔浓度，单位为毫摩尔每升（mmol/L）； ——1-或2-溶血磷脂酰胆碱摩尔质量的平均值，单位为克每摩尔（g/mol）； ——样品最终定容体积，单位为毫升（mL）； ——样品质量，单位为毫克（mg）。 8.2 精密度 本方法日内测定的相对标准偏差小于5%件下回收率范围在9.7%~103.5%。 8.4 检出限限为0.μg。 附 录 A （资料性附录） GB 1537—2002 GB 1537—2002 1 GB/T ××××—×××× GB/T ××××—×××× I 6 3 中 华 人 民 共 和 国 国家质量监督检验检疫总局 发布 ××××-××-××实施 ××××-××-××发布 酶改性磷脂中1-和2-溶血磷脂酰胆碱的测定 高效液相色谱法 Method for determination of 1- and 2- acyl lysophosphatidylcholine in