微生物检验(第2016版).pptVIP

食品微生物学检验 总则 GB4789.1-2016 二、实验室基本要求 1、检验人员 应具有相应的微生物专业教育或培训经历，具备相应的资质，能够理解并正确实施检验。 应掌握实验室生物安全操作和消毒知识。 应在检验过程中保持个人整洁与卫生，防止人为污染样品。 应在检验过程中遵守相关安全措施的规定，确保自身安全。 有颜色视觉障碍的人员不能从事涉及辨色的实验。 二、操作步骤 2、初发酵实验 每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液(液体样品可以选择原液)，每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤，每管接种1mL(如接种量超过1mL，则用双料LST肉汤)，36℃±1℃ 培养24h±2h，观察倒管内是否有气泡产生，24h±2h产气者进行复发酵试验(证实试验)，如未产气则继续培养至48h±2h，产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。 二、操作步骤 3、复发酵实验 用直径为3mm的接种环从所有48h±2h内发酵产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤管中，置36℃±1℃温箱内，培养48h±2h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管 二、操作步骤 4、可能数报告 根据大肠菌群阳性管数, 查MPN检索表，报告每 g (mL)样品中大肠菌群的MPN值 1g(mL)检样中最大可能数（MPN）表 16版*03版 一、操作步骤不同 16版*03版 二、发酵培养温度不同 03版方法：24h±2h 24h±2h 16版方法：24h~48h 48h±2h 三、发酵培养基不同 03版方法：乳糖胆盐肉汤、复发酵培养基 16版方法：月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤 煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤 16版*03版 四、结果报告单位不同 03版方法： MPN / 100g(mL) 16版方法： MPN / g(mL) 五、给出的MPN表不同 六、标准名称不同（测定、计数） 第二法 平板计数法 一、检验程序 二、操作步骤 1、样品的稀释 按照MPN法中的稀释方法进行 2、平板计数 选取2个~3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1mL。同时取1mL生理盐水加入无菌平皿作空白对照。 及时将15mL~20mL融化并恒温至46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)约倾注于每个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，在加3mL~4mLVRBA 覆盖平板表层。翻转平板，置于36℃±1℃培养18h~24h。 二、操作步骤 3、平板菌落数的选择 选取菌落数在15CFU~150CFU 之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落(如菌落直径较典型菌落小)。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大，最低稀释度平板低于15CFU 的记录具体菌落数。 二、操作步骤 4、证实实验 从VRBA 平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，少于10个菌落的挑取全部典型和可疑菌落。分别移种于BGLB肉汤管内，36℃±1℃培养24h~48h，观察产气情况。凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。 二、操作步骤 5、大肠菌群平板计数的报告 经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g(mL)样品中大肠菌群数。例:10-4样品稀释液1mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100×6/10×104/g(mL)=6.0×105CFU/g(mL)。若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。 备注： 6.0×105CFU/g(mL)也就是600000CFU/g(mL）这个作为我们公司统一的数据修约后的报告方式，若均无菌落生长则报告值为＜10CFU/g(mL） 列： 10-2样品稀释液1mL，在VRBA平板上有90个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有10个阳性管,则该样品的大肠菌群数为： 90×10/10×102/g(mL)=9000CFU/g(mL） 主要变化 16版与GB4789.3—2010相比,主要变化如下: ———增加了检验原理; ———修改了适用范围; ———修改了典型菌落的形态描述; ———修改了第二法平板菌落数的选择; ———修改了第二法证实试验; ———修改了第二法平板计数的报告。 食品国家安全标准 熟肉制品 G