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1002 生 物 工 程 学 报 乔想金 等/抗菌肽VIP 在毕赤酵母中的高效表达及鉴定
Chinese Journal of Biotechnology
/cjbcn Jun. 25, 2018, 34(6): 1002−1011
DOI: 10.13345/j.cjb.170506 ©2018 Chin J Biotech, All rights reserved
·生物技术与方法·
VIP
1,2 1 1 1 1
乔想金 ，李文新 ，白丽娟 ，胡巍 ，南怀燕
1 兰州兰石能源装备工程研究院 生物制造工程技术中心，甘肃 兰州 730300
2 中国科学院西北生态环境研究院，甘肃 兰州 730000
乔想金, 李文新, 白丽娟, 等. 抗菌肽VIP 在毕赤酵母中的高效表达及鉴定. 生物工程学报, 2018, 34(6): 1002–1011.
Qiao XJ, Li WX, Bai LJ, et al. Expression and identification of an antimicrobial peptide VIP in Pichia pastoris . Chin J Biotech,
2018, 34(6): 1002–1011.
摘 要: 基于人抗菌肽 VIP (Vasoactive intestinal peptide) 基因序列，按照毕赤酵母密码子偏好性设计引物；用
SOE-PCR 法扩增目的基因；然后将目的基因克隆至毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA 上，构建VIP 分泌表达菌
株 GS115-pPICZαA-vip 。用甲醇诱导 96 h 收集上清，用质谱进行鉴定，结果显示分泌表达产物与人抗菌肽 VIP
理论值 (3 326.82 Da) 完全一致，表明人抗菌肽VIP 成功得到分泌表达。琼脂糖凝胶扩散法实验结果显示，重组
VIP 对大肠杆菌Escherichia coli ATCC25922 和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus ATCC25923 都有很强的抗
菌活性，MIC (Minimal inhibitory concentration) 分别为8 mmol/L 和 16 mmol/L。进一步细胞毒性和溶血性实验结
果显示，重组VIP 对正常细胞NCM460 和IPEC-J2 没有毒性，其对SD 大鼠红细胞不具有溶血活性。通过透射电
镜观察了 VIP 的抗菌机制，结果显示VIP 主要通过破坏细胞膜的方式抑杀细菌。本研究为人抗菌肽VIP 的开发
应用和大量生产奠定了基础。
: 抗菌肽，基因克隆，毕赤酵母，分泌表达，抗菌活性
Expression and identification of an antimicrobial peptide VIP
in Pichia pastoris
1,2 1 1 1 1
Xiangjin Qiao , Wenxin Li , Lijuan Bai , Wei Hu , and Huaiyan Nan
1 Lanzhou Lanshi Energy Equipment Engineering Institute CO., LTD, Lanzhou 730300, Gansu, China
2 Northwest Institute
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