噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌技术的引进与运用-自贡市疾病预防.pptVIP

全自动核酸提取仪提取DNA 2、PCR扩增 在25ul反应体系中，上、下引物各1ul,2×Taq PCR MasterMix 13ul，DNA模板4ul，纯水6ul。PCR反应条件：预变性94℃5min ，变性94℃ 1min ， 退火60℃1mi n，延伸72℃1 min ，循环次数30次，最后充分延伸72℃10 min， 每次扩增分别设阳性及阴性对照 。 3、电泳产物分析 扩增产物 ，经2％琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察结果获得核酸指纹图谱 。 标准分枝杆菌核酸指纹图谱 自贡市分枝杆菌指纹图谱 自贡市分枝杆菌菌种鉴定结果 2012至2016年共完成3650株菌株DNA提取及鉴定工作，以核酸为模板扩增7个位点（16S rRNA，Rv0577，IS1561’，Rv1510，Rv1970，Rv3877/8和Rv3120）的目的片段，根据核酸指纹图谱初步鉴定结核分枝杆菌1634株、非洲Ⅰ型20株、非结核分枝杆菌38株。 该技术的引进与应用对了解我市结核分枝杆菌流行株的种型特征，进行分子流行病学调查和研究，临床诊断和治疗提供了病原学依据，并取得可喜的成果。 使患者个体及时得到诊治提供了保障，为控制结核病的传播具有实际意义，同时推动了中心结核病实验室检测能力的建设； 核酸指纹图谱鉴定意义 核酸指纹图谱技术对分枝杆菌菌种鉴定在四川省的首次应用后，已为省内推