近年来噬菌体研究和应用几个侧面.PDFVIP

维普资讯 病●学杂志 2．1●1日 V ir。1。glea SiⅡlea 近年来噬菌体研究及应用的几个侧面 罗 成 (中国科学院武汉舟摹研究所，武汉) TheOutlineofStudyand ApplicationforBacteriophage jI1RecentYears Luo Cheng (W uhan Institute0，Virology．Academi口Sinica，Wuhan) 关■一 ： 畦菌体转座子，蕾苗体载体 ，t苗体追踪 ，温敏调控 ，强启动子 Key W ord： traneposon of ph=ge，vector of ph~ge．tracer of phage．regulation of tempe- rature．stODg prom otet 近年来 由于基因工程的兴起，使噬菌体在分子遗传学方面得到广泛的应用。环境科 学的发展使人们不仅认识到噬菌体是 自然环境 中一类很重要的净化因子，而且也认识到 许多噬苗体与肠遭病毒在理化特性、分布等方面存在相关性，故被用来作为指示者、追 踪者，其存在置可充当持定环境 的污染指数。’医学科学的发展使人们发现许多具有 强烈 的毒性作用的细菌毒素是 由前噬菌体(prophage)DNA编码，而可采取新的治疗措施。 由 于噬苗体的应用反过来叉促进 了噬菌体本身的发展，这些包括 噬菌体的形态分类，核酸 序列 ，溶原转换(]ysogenlcconversion)，成斑理论，甲基化修饰、基因结构与调控，复 制与装配，启动子与表这载体，噬菌体转座子与插入突变等等。本文有望对这些进展作 一 扼要的评述，以促进我国科学工作者更好地利用噬菌体有益于人类的一面。 一 、 疃菌体在分子遗传学中的研究和应用 1973年 以前，^噬菌体只能再于大肠杆菌之间的局 限性转导，然 而 1973年 Doy等 人成功地利用 ^和 。把 大肠杆菌染 邑俸基因转入了Lycopersico esc“e Ⅱm和Ara— bidopsistltaliama两种植物的单倍体细胞系，他们用这两种细胞系的乳糖j兜陷型，检测 并证 明了转入的基因获得了表达…。当时他们为区另JI于细菌中的转化、转导、而 引入了 “转入 (transgcnsis)的概念。1974年 Thomas等人证明了 ^DNA 在 一定范围丢失 (低 本文于1987年 l2月 9日愎到 维普资讯 130 孝 喜。,19．8。 于 25 左右 )和在一定范围内外源 DNA插入 (总 DNA不超过 ^DNA的108 左右 )之 后． 噬菌体的外壳蛋 白仍能进行正常包装， 并形成有活力的噬菌体颗粒0。由此开始 构建了大量的 ^衍生型载体，并不断完善 “。用 DNA改造来的载体对重 组子筛选有 两种非常有效 而又方便 的方式 1．^。pi筛选，这是基于如下现 象而建立的： 野生型 枷茁苗体不能在 ．coli(F})溶原 菌株中生长，这种现象 即为 ^sFi(zsenslt~vetoPiinter— ference)。这是 由^噬菌体 DNA左 、右两臂之间的 red，galnma基因决 定 的 ， 然 而 的大多数载体都是置换型载体，当 red，gamma基因都被置换掉而使之 由sFi表型转 变为 sFi一表型，并可在 p：溶原化的寄主中正常生长，形成 噬菌斑，如 EMBL3，4和 ，1059就能利用这一筛选方式。2．suF 探针钓取，先在一个 sup 质粒上克隆一段探针 序列， 然后用这一探针质粒去转化另外已经收集了 重组噬菌体的 sup一受体细胞，如果 有对应的序列，就会通过同源重组实现 “杂 交”，并由此使带有琥珀突变的噬菌体裁体 DNA得 以校正，使