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MF66M5M13噬菌体单链基因组DNA快速提取试剂盒-聚合美
北京聚合美生物科技有限公司 Mei5 Biotechnology, Co., Ltd
北京市海淀区学院路甲5号768创意园B-1211 热线电话: (86)010M5 M13噬菌体单链基因组DNA
快速提取试剂盒使用说明书
产品名称 单位 货号
M5 M13噬菌体单链基因组DNA快速提取试剂盒 50T M665-01
【储存条件】
室温储存。
【产品简介】
M13和其它的丝状噬菌体载体,在文库构建和为序列测序提供单链DNA和引人突变方面十分有用。将适量M13丝状噬菌体或者相关噬粒(M13来源)感染的液体培养物离心,上清中的单链噬菌体DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,将盐、细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净噬菌体单链DNA从硅基质膜上洗脱。
【产品特色】
1. 不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
2. 节省时间,简捷,单个样品操作一般可在10分钟内完成。
3. 产量高,典型的产量800μl M13丝状噬菌体上清可以提取3μg噬菌体单链DNA。
4. 多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9。可以直接用来测序,一般典型可辨认读长达650bp。
【产品组份】
试剂盒组成
保存
50T
结合液MB
室温
25 ml
漂洗液WB
室温
15 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇
洗脱缓冲液EB
室温
10 ml
吸附柱AC
室温
50个
收集管(2ml)
室温
50个
本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
结合液MB低温时可能出现析出和沉淀,可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温
避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
【注意事项】
1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 开始实验前将需要的水浴先预热到50℃备用。
3. 结合液MB含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
【操作步骤】
提示:第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
以800μl噬菌体感染细菌培养上清提取举例:
1. 将M13丝状噬菌体或者相关噬粒(M13来源)感染的液体培养物分装在1.5毫升离心管,12,000rpm离心5分钟沉淀菌体。
2. 小心取800μl上清转入新的1.5ml离心管,加入400μl结合液MB,充分混匀。
如果使用的上清大于或者小于800μl,则结合液MB的用量需要按照比例增加或者减少。
3. 将上述混合物加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm离心15秒,倒掉收集管中的废液。
吸附柱一次最多只可以容纳大约700μl混合物,因此需要分次把混合物加到吸附柱内,重复步骤3。
4. 加入600μl漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30秒,弃废液。
5. 将吸附柱AC放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
6. 取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加60μl洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在 50℃水浴中预热), 室温放置1分钟,12,000rpm 离心1分钟。如果想得到较多量的DNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,10,000rpm离心1分钟。
洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积, 但是最小体积不应少于40μl,体积过小降低DNA洗脱效率,减少DNA产量。
7. DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。
附录(M13噬菌体感染细菌培养上清准备过程):
下面举例说明M13噬菌体感染细菌培养上清准备过程,详细的M13噬菌体(或M13来源噬粒)培养和上清准备过程请参见『分子克隆』第二版。
37℃
使用6%的过夜培养菌接种新鲜的LB培养液,37℃
根据M13噬菌体的储存液的浓度(滴度)按照0.5-1.5%(V/V)的比例加入噬菌体来感染宿主菌。37℃
将上面M13丝状噬菌体或者相关噬粒(M13来源)感染的液体培养物分装在1.5毫升离心管,12,000rpm离心5
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