清脉饮及其拆方对兔动脉粥样硬化闭塞症模型NO及ET表达影响.docVIP

清脉饮及其拆方对兔动脉粥样硬化闭塞症模型NO及ET表达影响 　　【摘要】目的：研究清脉饮及其拆方对兔动脉粥样硬化闭塞症模型NO及ET表达的影响。方法：选取SPF级雄性健康新西兰白兔为研究对象，建立动脉粥样硬化闭塞症动物模型，36只白兔随机分为全方组、模型组、空白组、活血组、软坚组、清法组。造模的各组在造模完成后恢复普通饮食并分别予以相应药物干预8周后取材。以硝酸还原法测定NO，放免分析法测定ET水平的变化。结果：全方组、软坚组、活血组NO的水平与空白组相比无统计学意义（P 0.05），清法组NO的水平明显高于空白组（P 0.05）。结论：清脉饮及其拆方能升高兔动脉粥样硬化闭塞症模型血液中NO的水平，降低ET的水平，对血管内皮细胞有保护作用，清法组效果最佳。 　　【关键词】动脉粥样硬化闭塞症；兔；NO ；ET 　　【中图分类号】R285.5【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2015）08-0010-02 　　动脉粥样硬化闭塞症（Atherosclerotic Occlusion， ASO）是指动脉粥样硬化（Atherosclerotic，AS）累及周围动脉并引起慢性闭塞的一种AS相关疾病。近来血管内皮功能在AS发生发展中的作用日益受到关注，许多学者认为血管内皮细胞损伤导致的内皮功能障碍不仅是AS 的一个始动环节，还是导致其不断进展的重要因素[1]。因此，改善和恢复血管内皮功能已经成为AS 防治的重要目标之一。清脉饮是根据名老中医奚九一教授软坚清脉方精简，以清法为主治疗ASO的有效方剂[2]，但是目前对以清法为主的复方中药治疗ASO的作用机理和疗效的研究很少，本实验在建立ASO动物模型的过程中使用清脉饮及其拆方进行干预治疗，旨在研究以清法为主改善血管内皮功能而达到对抗动脉粥样硬化的作用机理。 　　1资料与方法 　　1. 1 一般资料选用健康新西兰白兔36只（SPF级，青岛康大生物科技有限公司提供scxk （ 3 ）），雄性，体重（2.5～10.2） kg，随机分为全方组、模型组、空白组、活血组、软坚组、清法组，每组6只，于宁夏医科大学实验动物中心SPF级动物房饲养，室温20～22 ℃，湿度40%～50%，用普通饲料或高脂饲料饲养。普通饲料和高脂饲料均由青岛康大生物科技有限公司提供，高脂饲料配方：2%胆固醇、1%脱氧胆酸钠、5%猪油、92%普通饲料。 　　1.2 研究方法参照文献[3]造ASO动物模型。对全方组、模型组、活血组、软坚组、清法组白兔进行造模。造模方法[4]∶行造模的白兔自造模开始每天分别给予100g高脂饲料，第3天在3%戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉下行无菌手术，于右侧腹股沟下搏动处暴露股动脉，于无血管分支处用7号手术线绕动脉轻轻结扎，注意不要完全结扎。缝合切口，术后肌注青霉素20万U/只。第7天，静脉注射牛血清白蛋白（250mg/kg），继续喂养高脂饲料，共12周，造模完成。取胸主动脉组织行病理检查判断造模是否成功。继续予以普通饲料喂养8周，然后处死，取血及相关组织。实验持续共计20周。空白对照组：全程喂饲普通饲料，20周后处死。 　　1.3干预药品①全方：由垂盆草、昆布、大黄、丹参、牡蛎等12味药物组成；②软坚方：海藻、昆布等4味药物组成；③活血方：丹参、蒲黄等4味药物组成；④清法方：垂盆草、大黄等5味药物组成。以上中药饮片均由宁夏古方医院提供，依据传统方法煎煮、过滤，浓缩至140ml/剂。 　　1.4干预方法白兔经过12周造模完成后，自第13周起，全方组、活血组、软坚组、清法组相应予以清脉饮全方、活血方、软坚方和清法方的中药浓缩液灌胃，模型对照组予以灭菌水灌胃，共8周，白兔日灌胃液体用量为10ml?[KG-*1/5]（kg?d）-1。按体型系数换算法中人兔等效药量换算方法计算给药剂量，相当于每组生药量为全方组14g?[KG-*1/5]（kg?d）-1，软坚方组5g?[KG-*1/5]（kg?d）-1，活血方组4.07g?[KG-*1/5]（kg?d） -1，清法方组5.148g?[KG-*1/5]（kg?d）-1。 　　1.5 标本取材及组织处理耳?静脉穿刺取血约5ml，分别快速注入加入抗凝剂（10%EDTA二钠30μl、抑肤酶40μl）的试管和普通试管中，体积各半（加入抗凝剂的试管需轻轻混匀），于4℃ ， 3000rpm/min离心10min，分离血浆和血清，分装，-20℃冻存。 　　1.6检测项目与方法 　　1.6.1血清NO测定采用硝酸还原法，按试剂盒说明书操作。反应结束后，将试管内反应液倒入0.5cm光径比色杯中，蒸馏水调零，550nm波长处测定各管吸光度值。代入下列公式中计算血清NO含量。NO（μmol/l）=（样品管吸光度-空白管吸光