漆酶用于环境修复研究及应用前景.docVIP

漆酶用于环境修复研究及应用前景 　　摘要：本文对漆酶的来源、种类、结构及应用进行了叙述，漆酶最初是从植物中发现的，随后在动物和细菌中也发现了它的存在，真菌是漆酶的主要分泌者。漆酶作为多铜氧化酶家族的一份子，可以降解酚类、芳香类等化合物。漆酶在酒类制造、饮料制造、面制品制造及食用菌生产等食品行业有着广泛的应用；在造纸工业、染料降解、生物修复等环境修复领域也有着重要的应用前景。但在环境修复方面的实际运用与推广还需要更加深入的探究。 　　关键词：漆酶；种类；结构；应用 　　中图分类号：Q89文献标识码：A 　　漆酶作为多铜氧化酶家族的一部分，是一种含铜多酚氧化酶，跟其同源的蛋白质有抗坏血酸氧化酶和哺乳动物血浆铜蓝蛋白[1]。日本学者Yoshi在紫胶漆树（Rhus vernicifera）漆液中最早发现漆酶[2]。19世纪末，G.Betranel第一次将其以生漆固化的活性物质分离出来，并命名为漆酶（Laccuse）。自然界中的漆酶根据生产者的不同可分为植物漆酶、动物漆酶、细菌漆酶以及真菌漆酶，其中真菌漆酶是目前研究较多的一类。漆酶能催化氧化超过200种不同种类型的物质，广泛运用于食品工业，造纸行业、生物修复、生物燃料电池[3]等方面。 　　细菌产生的漆酶主要存在于细胞内，而真菌分泌的漆酶通常为胞外酶。国内外对于真菌漆酶和植物漆酶研究已有大量的报道，而对于细菌漆酶和动物漆酶的研究较少。 　　1漆酶的种类 　　1.1植物漆酶 　　在6000a前的中国，人们已经开始有意识的使用漆酶了。当时中国的艺术家们利用漆树受伤部位的分泌物，也就是利用漆酶的聚合作用来制造艺术品。漆树漆酶是最早被报道的漆酶，同时也是植物漆酶中活性最高的漆酶。近年来在杨树漆酶被报道的同时，无花果、烟草、棉花、大槭树[4]等植物中也都相继发现了漆酶的存在。 　　1.2动物漆酶 　　动物漆酶的存在，是近几年才发现的。节肢动物如淡水鳌虾血细胞中发现有漆酶存在，可能参与甲壳的硬化等生理过程。昆虫中也有漆酶的报道，如甲壳虫赤拟谷盗漆酶，可能参与甲壳角质蛋白的硬化、变色等。在果蝇的免疫反应中，漆酶参与黑色素的形成，烟草天蛾体内的漆酶可能对其摄取的植物中有毒化合物进行氧化、脱毒处理。 　　1.3细菌漆酶 　　原核生物和真核生物同样具有生产漆酶的能力，包括很多革兰氏阳性及阴性细菌；相关的基因分析数据表明，这些漆酶细菌可能是从极端嗜热菌早期进化出来的分支。放线菌Streptomyces cyaneus CECT3335所产的漆酶与真菌漆酶性质相似[5]；枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis中的CotA蛋白表现出了漆酶的活性和特征[6]。 　　1.4真菌漆酶 　　担子菌门的白腐真菌是自然界中漆酶的主要生产者，大部分的白腐真菌分泌的漆酶为胞外漆酶。至今为止，报道产漆酶的真菌已超过1000种[7]。其中除了常见的担子菌能分泌漆酶外，其他真菌亦有产漆酶的能力，如地衣真菌。而在众多的漆酶生产者中，白腐密孔菌因容易培养、产酶活力高等特点，在漆酶的生产及应用中具有巨大的潜力。 　　2漆酶的结构 　　漆酶分子结构呈球状，是由3个cupredoxin-like结构域结合形成，这种结构形式是铜蓝蛋白家族所共有的[8]。漆酶多为一条多肽链组成的单体酶，相对分子质量主要分布在5×104-1×105之间，由500～550个氨基酸组成[9]，皆为糖蛋白，含糖质量分数在10%～80%，碳水化合物的质量分数约占15%～45%。近年来Kaichangl等测试了4种含糖质量分数差别显着的漆酶的稳定性，发现含糖质量分数高的漆酶既没有提高漆酶的热稳定性，也不能阻止自身失活[10]。纵观近年来不同来源的漆酶，其氨基酸序列相似性并不高，例如子囊菌漆酶与担子菌漆酶的序列相似性仅在15%左右[8]。 　　漆酶分子结构中一般含有4个Cu原子[11]，根据不同酶分子的磁学和光谱学性质的不同可将漆酶分子中4个Cu原子分成3类：其中单电子受体有Ⅰ型Cu（T1Cu）1个和Ⅱ型Cu（T2Cu）1个，呈顺磁性；双电子受体有Ⅲ型Cu（T3Cu）2个，是耦合离子对，呈反磁性。形成单核中心的是Ⅰ型Cu原子，而形成三核铜簇的是Ⅱ型和Ⅲ型Cu原子。在610nm时，Ⅰ型Cu原子有呈蓝色的强烈光吸收，Ⅱ型Cu原子有无特征吸收光谱，具有电子顺磁共振效应（EPR）性质；而在330nm附近，Ⅲ型Cu原子有吸收带，无EPR性质。漆酶分子结构中也会存在其他金属原子，取代铜原子从而使铜原子少于4个。Palmieri G等从糙皮侧耳（Pleurotus ostreatus）中纯化的一种新型漆酶POXA1只有1个Cu，却含有2个Zn原子和1个Fe原子，因为缺少T1Cu，在610nm处没有吸收峰，因此该酶蛋白呈现乳白色[12]。 　　3漆