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纤维素降解菌筛选与复合菌群构建 　　doi：10.15889/j.issn.1002-1302.2017.13.061[HT9.] 　　摘要：堆肥中的纤维素是制约堆肥进程的关键。通过对样品进行常温和高温多代驯化，获得4株高效纤维素降解菌，其中2株常温菌Bacillus amyloliquefaciens LZN01、Bacillus amyloliquefaciens LZN02，2株高温菌Bacillus licheniformis LZN03、Bacillus licheniformis MLY0。4株菌对滤纸均有降解能力，且常温菌复合菌系的滤纸崩解能力、滤纸酶活性与CMC酶活性分别为10.81%、0.17 U/mL与7.41 U/mL，高温菌复合菌系分别为5.69%、0.10 U/mL与12.69 U/mL。4株菌间不存在拮抗效应，多数能够交叉生长，能够构建成为复合菌群。因此，这4株菌在构建纤维素复合菌群并应用到堆肥体系中具有一定的前景。 　　关键词：纤维素；降解菌；复合菌群；堆肥 　　中图分类号： S182文献标志码： A[HK] 　　文章编号：1002-1302（2017）13-0229-04[HS）][HT9.SS] 　　收稿日期：2016-03-18 　　基金项目：黑龙江省普通本科高等学校青年创新人才培养计划（编号：UNPYSCT-2015092）。 　　作者简介：潘林（1964―），男，黑龙江齐齐哈尔人，硕士，副教授，主要从事生物学方面的教学与研究工作。Tel：（0452）2738361；E-mail：plin@163.com。 　　通信作者：王志刚，博士，副教授，主要从事微生物学方面的教学与研究工作。Tel：（0452）2738781；E-mail：wzg1980830@。[HJ] 　　[ZK）] 　　堆肥是畜禽废弃物无害化、资源化的有效手段，但其中高含量的纤维素是制约堆肥进程的关键[1]，在堆肥过程中接种纤维素降解菌，可以有效促进纤维素的分解，加速堆肥腐熟，并提高堆肥的品质[2]。但单一菌株在堆肥中可发挥的作用有限，筛选高效纤维素降解菌株并构建高效的堆肥菌系，是处理畜禽废弃物的有效手段。构建不同功能的复合菌系可加速堆肥发酵进程，因而受到广泛关注[3-4]。因此，本试验从腐殖土和堆肥样品中分离筛选高效纤维素降解菌株，并构建高效功能性复合菌系，为堆肥腐熟剂的研发提供参考。 　　[BT1#]1材料与方法 　　1.1试剂及仪器 　　试剂：羧甲基?w维素钠购于天津科密欧化学试剂有限公司，其余试剂均为国产分析纯。 　　仪器：T6新世纪紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；D-37520离心机（德国）；100-230V纯水系统（MILLPORE）。 　　1.2培养基 　　羧甲基纤维素钠培养基：CMC-Na 20 g，Na2HPO4 2.5 g，KH2PO4 1.5 g，蛋白胨2.5 g，琼脂20 g，蒸馏水定容至 1 000 mL。 　　刚果红培养基：K2HPO4 0.5 g，MgSO4?7H2O 0.25 g，CMC-Na 1.88 g，刚果红0.2 g，明胶2 g，琼脂20 g，蒸馏水定容至1 000 mL。 　　滤纸条培养基：KH2PO4 1.0 g，NaCl 0.1 g，NaNO3 2.5 g，MgSO4 0.3 g，FeCl3 0.01 g，CaCl2 0.1 g，滤纸条（1 cm×6 cm）3条/三角瓶，蒸馏水定容至1 000 mL。 　　液体产酶发酵培养基：CMC-Na 7.5 g，大豆粉7.5 g，CaCl2?2H2O 0.3 g，MgSO4?.7H2O 0.25 g，KH2PO4 4 g，滤纸2.5 g，蒸馏水1 000 mL，121 ℃，灭菌20 min。 　　1.3样品来源 　　从扎龙自然保护区采集的腐殖土和黑龙江田雨绿色农业工程有限公司的鸡粪堆肥中取样，并进行常温（30 ℃）及高温（50 ℃）多代驯化，筛选常温、高温菌。 　　1.4试验方法 　　1.4.1菌株的筛选与纯化 　　取5 g驯化后的样品与水按 1 ∶[KG-*3]10 比例混合，130 r/min振荡10 min，静置。取上清液稀释涂布于刚果红培养基上，常温菌置于30 ℃下培养；高温样品于50 ℃水浴30 min后，取上清液进行稀释涂布，50 ℃培养。挑取透明圈清晰的菌株进行分离纯化，将所得到的菌株接入滤纸条培养基中验证其对滤纸的分解情况。 　　1.4.2滤纸崩解试验 　　设置单一菌株试验组、常温混合菌与高温混合菌试验组，将各菌株组合的菌液按2%比例接入液体选择培养基中，将各菌液按照2%比例接种于100 mL滤纸条培养基中，常温菌30 ℃、130 r/min条件下振荡