纤维素酶在苜蓿叶蛋白提取中应用.docVIP

纤维素酶在苜蓿叶蛋白提取中应用 　　摘要：将纤维素酶应用于苜蓿叶蛋白的提取，研究酶解反应时间，反应温度，底物浓度和加酶量4因素不同水平对苜蓿叶蛋白提取率的影响，并对提取工艺进行优化，试验表明对提取率影响顺序为：反应温度反应时间加酶量底物浓度，最佳工艺为，加酶量10 U?g-1，底物浓度1∶6，40℃反应1 h。 　　关键词：苜蓿；纤维素酶；叶蛋白 　　中图分类号：TQ936.2文献标识码：A文章编号：0439-8114(2008)07-0830-03 　　 　　Application of Fibrin Enzyme to Separate Alfalfa Leaf Protein 　　 　　ZENG Fang-zhi1，TIAN Li-ping1，XUE-Lin2，LI-Min1 　　 (1.Colllege of Biology， Shihezi University，Shihezi 832003，Xinjiang，China；2.Shihezi Vegetable graduate school，Shihezi 832003，Xinjiang，China) 　　 　　Abstract：In this research fibrin enzyme was used to separate alfalfa leaf protein. The effects of reaction time，temperature，content chroma and the quantity of enzyme in different levels on the extraction ratio of alfalfa leaf protein was also analysised. The results showed that the influencing sequence were as follows： reaction temperature timeenzyme’s quantitycontent chroma.The optimum parameters were enzyme’s quantity 10u?g-1，chroma content 1∶6， reaction time 1 h under 40℃. 　　Key words：alfalfa； fibrin enzyme； leaf protein 　　 　　紫花苜蓿(Medicago Sativa Linn.)为豆科(Leguminosae)多年生草本植物[1]。苜蓿叶蛋白产量高，是叶蛋白生产中常用的原料[2，3]。植物茎叶中的蛋白质包裹于细胞壁内，需要通过切碎，压榨等方法挤出细胞中的汁液，才能获得蛋白质部分。苜蓿细胞壁含有大量纤维素(18%～30%)[4]，而纤维素酶是一种很好的生物催化剂，具有很强的降解纤维和崩溃植物及种子细胞壁的功能[5]。用纤维素酶催化苜蓿细胞壁中的纤维素水解，使纤维素增溶和糖化，降解植物细胞壁，以利于叶蛋白的提取和分离[6]。加热法是应用最早、最普通的传统方法，但耗能大，成本高，不利于经济化生产[7]，另外常用方法还有酸法，碱法等。纤维素酶已广泛应用于食品加工领域，但将其应用于叶蛋白提取的研究很少，因此本文对这一方法进行探索，为生产实践提供理论依据。 　　 　　1材料与方法 　　 　　1.1材料 　　原料：选取石河子大学农试场孕蕾中期[8]的阿尔冈金紫花苜蓿(Medicago sativa L.)。纤维素酶：上海源聚科技有限公司，酶活力15 U?mg-1。试验仪器：JA2003型电子天平，HR2838型组织捣碎机，TDL-5型台式电动离心机，PHS-10B型酸度计，DHG-9101-2S型电热恒温干燥箱，基尔特克2300凯氏定氮仪。主要试剂：浓硫酸、硫酸铜、硫酸钾等。 　　1.2方法 　　1.2.1提取工艺除去苜蓿表面的土壤，摘除枯萎、变黄、腐烂和有病虫害的叶片，再将原料切成长度约1 cm的小段，经纤维素酶处理后置入打浆机，加入3倍重量的水，打浆2～3 min，倒出草浆2层纱布过滤，清洗打浆机1次，将清洗液与滤渣混合过滤，收集所有滤液。用酸调节滤液pH值至4.0，沉淀，离心分离叶蛋白，烘干，测定提取率。 　　1)单因素对叶蛋白提取率的影响研究反应温度，反应时间，加酶量和底物浓度的不同水平对叶蛋白提取率的影响。由于纤维素酶的最适pH值为5，本试验中酶解溶液的pH值均调节为5。反应温度：底物浓度1∶8，加酶量20 U?g-1，在40℃，50℃，60℃，70℃反应1 h。反应时间：底物浓度1∶8，加酶量20 U?g-1，在50℃分别反应1 h，1.5 h，2 h。加酶量：底物浓度1∶8，加酶量取0，