糙皮侧耳几丁质酶基因PoChi1克隆及表达分析.docVIP

糙皮侧耳几丁质酶基因PoChi1克隆及表达分析 　　利用反转录PCR（reverse transcription PCR，RTPCR）克隆糙皮侧耳（Pleurotus ostreatus）几丁质酶基因PoChi1，将其克隆至原核表达载体，得重组质粒pEASYPoChi1，转化至大肠杆菌Escherichia coli BL21（DE3）；通过半定量RTPCR分析该基因在糙皮侧耳不同发育阶段的表达。糙皮侧耳几丁质酶基因PoChi1序列长度为1188 bp，编码395个氨基酸，N端24个氨基酸为信号肽。经IPTG诱导后SDSPAGE检测，该基因编码产物的相对分子量约为29 kDa。PoChi1在糙皮侧耳成熟子实体期的表达量最高。 　　几丁质酶基因； RTPCR； 糙皮侧耳； 原核表达； 表达模式 　　几丁质是真菌细胞壁的主要成分[1]，几丁质酶可以水解几丁质产生几丁寡糖和 N乙酰氨基葡萄糖，在细胞壁结构修饰和真菌形态发生过程中起重要作用[2，3]。糙皮侧耳具有大量的同源几丁质酶[4]，但目前没有关于糙皮侧耳几丁质酶基因研究的相关报道，笔者进行糙皮侧耳几丁质酶基因的克隆与分析，为进一步研究几丁质酶对糙皮侧耳生长发育的影响提供参考。 　　1材料与方法 　　1.1菌株和质粒 　　糙皮侧耳（P. ostreatus）新831由河南农业大学生命科学学院保藏。 　　大肠杆菌Esch