芪参益气滴丸对肺心病大鼠心肌腺苷酸含量影响.docVIP

芪参益气滴丸对肺心病大鼠心肌腺苷酸含量影响 　　[摘要]采用单次腹腔注射野百合碱（MCT）的方法复制大鼠肺心病模型，芪参益气滴丸浸膏灌胃给药6周后，通过HPLC检测大鼠右心肌组织中的腺苷酸（ATP，ADP，AMP）的含量，进而考察芪参益气滴丸对肺心病大鼠心肌能量代?x的影响。结果显示ATP，ADP，AMP达到良好分离；ATP，ADP，AMP在考察的浓度范围内，线性关系良好；加样回收率均在90%～108%；与模型组相比，高剂量给药组大鼠心肌中ATP的含量显著性升高，ADP的含量有升高趋势，AMP含量有下降趋势。提示芪参益气滴丸能够改善心肌组织能量代谢系统。通过HPLC，为测定心肌组织中ATP，ADP，AMP含量提供了一种快速、高效的定性定量分析方法，为生物样品中能量代谢相关含量的测定研究提供了参考。 　　[关键词]芪参益气滴丸； 肺心病； 能量代谢； HPLC； 含量测定 　　慢性肺源性心脏病（简称肺心病，PHD），属于中医学 “肺胀”、“喘病”、“水肿”等范畴，病机多为肺、脾、心、肾亏虚，进而引起痰、瘀、水潴留。益气养阴、活血通络是其基本治法[12]。芪参益气滴丸（QS）具有益气通脉、活血止痛的作用，在临床上主要用于冠心病和心力衰竭，且对肺心病也有一定的疗效，但对肺心病的治疗机制尚不明确[3]。肺心病后期可出现全心衰，心肌能量代谢底物利用变化，能量消耗增加，游离脂肪酸堆积，抑制糖酵解，使心肌能量代谢进一步恶化[45]。有研究表明，QS能通过增加心肌组织中ATP的含量来改善心肌能量代谢[6]。作者推测QS可能通过改善心肌能量代谢的途径从而对肺心病起到治疗作用，本实验对此进行了研究。 　　1材料 　　岛津高效液相色谱仪（日本岛津公司）；电子分析天平（BT125D，赛多利斯科学仪器有限公司）；超声破碎仪[Biosafer250up，赛飞（中国）有限公司]；超速离心机（sigma3k15，北京五洲东方科技发展有限公司）；超声清洗仪（KQ500E，昆山市超声仪器有限公司）。 　　QS浸膏（黄芪、丹参、三七、降香，天士力制药集团股份有限公司）；野百合碱（MCT，GR132140225，南京广润生物制品有限公司）；色谱纯乙腈（500 mL，天津市康科德科技有限公司）；三磷酸腺苷二钠，二磷酸腺苷二钠，5′腺嘌呤核苷酸二钠盐（批北京索莱宝科技有限公司）；氢氧化钠，磷酸二氢钾，氢氧化钾（500 g，分析纯，天津市化学试剂供销公司）；高氯酸（天津市化学试剂供销公司）。 　　40只雄性Wistar大鼠，180～200 g，SPF级，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号SCXK（京 　　2方法 　　21实验动物饲养 　　饲养于天津市放射医学研究所，温度（22±2） ℃，湿度（60±5）%。饲料为标准鼠粮，自由摄食饮水。 　　22实验动物分组 　　将40只大鼠适应性喂养1周后，随机分为4组：对照组（C，n=10），模型组（M，n=10），QS低剂量组（L，n=10），QS高剂量组（H，n=10）。 　　23肺心病模型的复制 　　无水乙醇和生理盐水（2∶8）混合液将MCT配成1%的溶液备用。大鼠适应性喂养1周后，M，L，H组单次腹腔注射MCT（60 mg?kg-1），C组腹腔注射相应体积的生理盐水。 　　24给药方法 　　造模次日起，L组灌服2倍临床等效剂量的QS浸膏（945 mg?kg-1），H组灌服4倍临床等效剂量的QS浸膏（189 mg?kg-1），C和M组灌服相应体积生理盐水，每日1次，连续给药6周后进行药效学研究。 　　25大鼠心肌组织中ATP，ADP，AMP的测定 　　251对照品的制备 　　称取ATP对照品111 mg，ADP对照品096 mg，AMP对照品119 mg，分别加蒸馏水定容至1 mL，各取3种储备液一定量混合后得混标溶液，4 ℃避光保存，备用。 　　252样品的制备 　　取大鼠右心肌组织约200 mg，按心肌组织质量高氯酸溶液（042 mol?L-1）体积 1∶5加高氯酸溶液，在溶液中剪碎心肌组织，于4 ℃，3 000 r?min-1离心10 min，取上清液，加入KOH溶液（05 mol?L-1）调节pH在60左右，静置5 min，同条件下离心10 min，取上清液，过022 μm微孔滤膜，得到样品溶液[78]。 　　253色谱条件 　　Venusil MP C18色谱柱（46 mm×150 mm，5 μm）；流动相乙腈（A）磷酸盐缓冲液（B，pH 61），梯度洗脱，0～20 min，0% A，20～30 min，0%～60%A，30～45 min，60%～0%A；柱温为室温；流速1 mL?min-1；检测波长254 nm；进样量