尿中马尿酸、甲基马尿酸高效液相色谱法1原理.PDFVIP

中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所 编号：NIOHP-S-11 尿中马尿酸、甲基马尿酸的高效液相色谱法 1 原理 尿样在酸性条件下用乙腈提取其中的马尿酸（HA ）、甲基马尿酸（MHA ），用饱和氯 化钠溶液作为分离剂使水与乙腈分层，经C18柱分离，紫外检测器检测，以保留时间定性， 峰高或峰面积定量。 2 仪器 2.1 高效液相色谱仪，具紫外检测器。 2.2 离心机，3000r/min 。 2.3 涡旋振荡器。 2.4 容量瓶，10mL、2mL 。 2.5 具塞离心管，5mL 。 2.6 微量注射器，10μL、100μL 。 2.7 分析天平，感量0.1mg 。 3 试剂 3.1 盐酸（ρ = 1.19g/mL ），分析纯。 20 3.2 乙腈（ACN ），色谱纯。 3.3 冰乙酸（ρ = 1.05g/mL ），分析纯。 20 3.4 氯化钠（NaCl ），分析纯。 3.5 甲醇（CH OH ），色谱纯。 3 3.6 盐酸溶液，1+1。 3.7 马尿酸（HA ），色谱纯。 3.8 2- 甲基马尿酸（2-MHA ），色谱纯。 3.9 3- 甲基马尿酸（3-MHA ），色谱纯。 3.10 4- 甲基马尿酸（4-MHA ），色谱纯。 3.11 HA标准溶液[ρ （HA ）=20.0mg/mL] ：准确称取0.2000g，用3.5%盐酸-乙腈溶解，定量转 移入10mL容量瓶中，用3.5%盐酸-乙腈稀释至刻度。此溶液为20.0mg/mL标准溶液。 3.12 MHA标准混合溶液[ρ 4.0mg/mL] ：分别准确称取0.0400g 2-MHA 、0.0400g 3-MHA 、 0.0400g 4-MHA ，用3.5%盐酸-乙腈溶解，定量转移入同一10mL容量瓶中，用3.5%盐酸-乙腈 稀释至刻度。此溶液为4.0mg/mL MHA标准混合溶液。 4 样品的采集、运输和保存 按 《职业卫生生物监测总则》进行样品采集。采集后的尿液应立即按1% （v/v ）的比例 加入盐酸后进行保存。样品在4 ℃条件下有效期为15d。 5 分析步骤 5.1仪器操作参考条件 波 长：235nm 色谱柱：250mm×4.6mm×5μm C18 柱 温：30℃ 进样量：3μL 流动相：甲醇+0.4%冰乙酸=35+65 流 速：0.8mL/min 第1页/共3页 中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所 编号：NIOHP-S-11 5.2标准曲线的配制和测定 取7只2mL容量瓶，按下表1配制标准曲线。 表1 HA、MHA标准系列溶液配制 0 1 2 3 4 5 6 HA标准溶液，μL 0.0 2.0 4.0 10.0 20.0 50.0 100.0 MHA混合标准溶液，μL 0.0 2.0 4.0 10.0 20.0 50.0 100.0 定容体积，mL 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 HA浓度，μg/mL 0.0 20.0 40.0 100.0 200.0 500.0 1000.0 2-MHA浓度，μg/mL 0.0 4.0 8.0 20.0 40.0 100.0 200.0 3-MHA浓度，μg/mL 0.0 4.0 8.0 20.0 40.0 100.0 200.0 4-MHA浓度，μg/mL 0.0 4.0 8