膜型基质金属蛋白酶―1表达对肝细胞癌血管生成拟态形成影响.docVIP

膜型基质金属蛋白酶―1表达对肝细胞癌血管生成拟态形成影响 　　[摘要] 目的 研究膜型基质金属蛋白酶-1（MT1-MMP）表达对肝细胞癌血管生成拟态（VM）形成的影响及机制。 方法 构建靶向MT1-MMP的RNA干扰质粒载体，转染肝癌细胞系Bel7402，实时定量PCR及Western blot检测干扰效果；在体外三维细胞培养体系中观察其对VM管状结构形成的影响；Transell侵袭小室实验检测细胞侵袭能力。 结果 靶向抑制MT1-MMP的表达下调肿瘤细胞侵袭能力，影响肝癌细胞在三维细胞培养体系中VM管状结构的形成。 结论 MT1-MMP表达影响肝细胞癌VM的形成，可能成为肝细胞癌抗血管生成治疗的新靶点。 　　[关键词] 肝细胞癌；基质金属蛋白酶；血管生成拟态；RNA干扰 　　[中图分类号] R735.7 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）12（c）-0013-04 　　Eeffects of expression of membrane-type 1 matrix metalloproteinase on vasculogenic mimicry formation in hepatocellular carcinoma 　　CHENG Rui CAI Xinran ZHOU Haohui KE Kun CHEN Yanling 　　Department of Hepatobiliary Surgery， Union Hospital Affiliated to Fujian Medical College， Fujian Province， Fuzhou 350001， China 　　[Abstract] Objective To investigate the effect of MT1-MMP on vasculogenic mimicry （VM） formation in hepatocellular carcinoma （HCC） and discuss its possible mechanisms. Methods RNA interfere plasmid targeting MT1-MMP was constructed and transfected into a HCC cell lines. Interference effect was detected by real time PCR and Western blot. VM networks in 3D cell culture system were observed with a microscope. Cell invasion assay was performed using 24-well transwell. Results Inhibition of MT1-MMP expression impaired VM network formation in vitro by down-regulating cell invasion. Conclusion MT1-MMP influences vasculogenic mimicry formation in HCC cell line and offers a potential molecular target for HCC antiangiogenesis therapy. 　　[Key words] Hepatocellular carcinoma； Matrix metalloproteinase； Vasculogenic mimicry； RNAi 　　1999年Maniotis等[1]在对眼葡萄膜色素瘤及转移性皮肤黑色素瘤的研究中发现一种无内皮细胞参与，由肿瘤细胞排列形成的管道结构，血管造影证实其参与肿瘤的血液供应。他们将这种血管样结构命名为血管生成拟态（vculogenic mimicry，VM）。VM合理的解释了目前针对内皮细胞的抗血管生成药物实际疗效与预期存在较大差距的原因，对经典的抗肿瘤血管生成治疗理论提出了挑战[2]。后续的研究证实VM存在于多种高侵袭性的肿瘤，且存在VM的患者预后不佳[3-5]。原发性肝细胞癌是一种恶性程度、侵袭性高的实体肿瘤，手术切除后复发率高，预后较差[6-7]。肝细胞癌中VM的存在已被证实[8-10]。但目前肝细胞癌VM形成机制及治疗靶点的研究仍处于起步阶段。本研究拟探讨膜型基金属蛋白酶（MT1-MMP）表达对肝细胞癌VM生成的影响，为肝细胞癌抗血管生成治疗提供新的思路。 　　1 材料与方法 　　1.1 细胞株及主要试剂 　　Bel 7402肝癌细胞系购于中国科学院典型培