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芍药芽总RNA提取方法研究 　　摘要： 　　以处于休眠和解除休眠时期的芍药芽为试验材料，采用改良CTAB法、Trizol法和EASYspin Plus植物RNA快速提取试剂盒提取其总RNA，通过核酸蛋白仪、琼脂糖凝胶电泳和RT-PCR检测所提总RNA样品的品质。结果表明，Trizol法没有提取到芍药芽总RNA；EASYspin Plus植物RNA快速提取试剂盒提取的总RNA浓度太低，无法满足下一步试验的要求；改良CTAB法提得的总RNA较完整，条带清晰，品质较优，28S rRNA亮度约是18S rRNA的2倍，且无降解现象。以改良的CTAB法提取的总RNA为模板进行内参Actin扩增，得到的条带清晰，与目的片段大小一致，进一步证明此方法提取的总RNA能够满足后续试验的要求。 　　关键词：芍药芽；总RNA；提取；RT-PCR 　　中图分类号：S682.1+20.1文献标识号：A文章编号：1001-4942（2015）02-0016-05 　　AbstractThe total RNA was extracted from dormancy and dormancy-released peony buds by modified CTAB method， Trizol method and EASYspin Plus RNA rapid isolation kit respectively. The quality of the extracted RNA was tested by protein nucleic acid analyzer， agarose gel electrophoresis and RT-PCR. The results showed that the total RNA could not be extracted by Trizol method， and that extracted by EASYspin Plus RNA rapid isolation kit was too lower to meet the requirement of further experiment. The total RNA extracted by modified CTAB method was more complete with clearer bands and better quality， and the brightness of 28S rRNA was about 2 times of that of 18S rRNA with no degradation. Using the total RNA extracted by modified CTAB method as template to amplify the internal reference gene Actin， the obtained bands were clear and with the same size to the target fragment， which further proved that the total RNA extracted by modified CTAB method could meet the requirement of the later experiment. 　　Key wordsPeony bud； Total RNA； Extract； RT-PCR 　　芍药花大色艳，花型丰富，自古以来深受我国人民喜爱，是我国的传统名花。近几年来，关于芍药的研究报道逐渐增多，内容主要涉及植物生理和组织培养等方面，分子生物学方面的研究报道较少。RNA是生物体重要的遗传物质，RNA的提取是分子生物学的基础试验，RT-PCR、荧光定量PCR、cDNA文库构建、Northern杂交等都需要质量好、完整性高的RNA1。从芍药芽中提取高质量的总RNA是开展各项后续分子生物学试验的前提和基础，是研究基因表达的重要环节。但是芍药芽中富含多糖、多酚及某些无法确定的次生代谢产物，给其分离纯化带来很多困难2。 　　植物RNA提取的方法很多，有CTAB法、改良CTAB法、改良SDS法、Trizol法及一些在此基础上延伸出的植物RNA提取试剂盒等。到目前为止，关于芍药芽总RNA提取的具体方法尚未见报道，且不同植物的不同组织，甚至同一种植物的不同组织，其RNA提取的具体方法也可能不同，因此有必要筛选理想的芍药芽总RNA提取方法。本试验采用改良CTAB法、Trizol法和EASYspin Plus植物RNA快速提取试剂盒三种方法提取芍药芽的总RNA，以期筛选出最适合的方法，为后续的分子生物学研究奠