八腐竹中蛋白质的测定——凯氏定氮法.PPTVIP

项目三：食品中一般成分的检验 河 源 职 业 技 术 学 院 实验八 腐竹中蛋白质的测定——凯氏定氮法 河源职业技术学院 李叶青 检验依据 腐竹产品标准 GB/T22106-2008 非发酵豆制品 实验八 腐竹中蛋白质的测定 一、参考的检测标准 二、实验目的 三、实验原理 四、实验仪器与用具 五、实验试剂与用途 六、实验步骤与相关原理 七、操作要点 八、数据记录与结果计算 九、允许误差或精密度要求 十、结果与讨论 学习内容 实验八 腐竹中蛋白质的测定----凯氏定氮法 GB/T5009.5-2010 实验目的 重点掌握凯氏定氮法测定蛋白质的原理与操作 能够熟练地进行样品的消化； 学会操作自动凯氏定氮仪； 能结合实验步骤理解实验原理； 能结合实验现象与操作总结操作细节和注意事项。 实验原理 样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化(digest)，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出。 而样品中的有机氮(organic nitrogen)转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。 然后加碱蒸馏，使氨蒸出，用硼酸吸收后再以标准盐酸或硫酸溶液滴定。 根据标准酸的消耗量计算出含氮量，再乘以蛋白质系数，得到蛋白质含量。 实验八 腐竹中蛋白质的测定 实验八 腐竹中蛋白质的测定 实验仪器与用具 凯氏烧瓶、电子天平、电炉、小漏斗、玻璃珠、铁架台、自动凯氏定氮仪、锥形瓶、酸式滴定管等。 实验试剂与药品 浓硫酸、硫酸铜、硫酸钾、20g/L硼酸溶液、400g/L氢氧化钠溶液、甲基红-溴甲酚绿混合指示剂、0.05mol/L盐酸标准滴定溶液。 实验八 腐竹中蛋白质的测定 实验步骤 1、样品消化 2、样品消化液的蒸馏 3、蒸馏液的吸收与滴定 4、结果计算 实验八 腐竹中蛋白质的测定 称取腐竹1.5g左右，加入0.2g硫酸铜，6g硫酸钾于一称量纸内，连同称量纸一并送入消化瓶中，再加入30mL浓硫酸，在消化瓶口放置一小漏斗，漏斗中放一玻璃珠。同时做空白实验。 样品处理准备 消化 将凯氏消化瓶用铁架台固定在电路上呈45°角，先小火加热，待泡沫停止，瓶内冒白烟，改为中火，待烟散尽后加大火力，当瓶内溶液变为澄清透明的蓝绿色后，继续加热0.5-1小时，取下，冷却定容至100mL。 蒸馏 使用自动凯氏定氮仪 设置蒸馏程序内的硼酸添加量30mL、加碱量15mL、稀释水量10mL、蒸馏时间5min等参数，取10mL样液于蒸馏管中，安装至仪器蒸馏室内，拉上安全保护门，在锥形瓶内加入2-3滴混合指示剂，放置在接收室内进行蒸馏。 将蒸馏好的吸收液用已标定好的0.05mol/L盐酸，滴定至刚好变色，记录盐酸消耗体积。平行测定2-3次。 滴定 实验流程 操作细节图解： （1）样品消化 样品+0.2g硫酸铜+6g硫酸钾+20ml浓硫酸+玻珠数粒 先小火炭化，无泡沫后，加大火力，液体变蓝绿透明，继续加热微沸30分钟，消化过程需不时转动烧瓶，洗下瓶壁上固体残渣。 45度角 消化终点 瓶口不能对着人 盖上小漏斗 液体样品需先蒸干水分再进行消化 （2）蒸馏 将消化液全部转移 到100ml容量瓶中 加10ml硼酸溶液和混合指示剂2～3d 加入NaOH溶液后颜色为深蓝色或褐色 通入蒸汽开始蒸馏 冷凝管下口浸入硼酸溶液中 取10ml消化稀释液沿小玻璃杯移入反应室，少量蒸馏水冲洗，塞紧棒状玻璃塞，向小玻璃杯内加入10ml40%NaOH,提起玻璃塞，使NaOH缓慢流入反应室，立即塞紧玻璃塞，并在小玻璃杯中加水使之密封。 吸收液变蓝色后继续蒸馏5分钟，将冷凝管尖端提离液面再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管尖端，取下接收瓶，关闭电源 （2）蒸馏 （2）蒸馏 本实验使用自动凯氏定氮仪进行蒸馏与吸收操作。原理与注意事项与手动蒸馏相同。 自动凯氏定氮仪的操作 先检查定氮仪的自动加液桶内氢氧化钠、硼酸和蒸馏水是否足够，冷凝水是否连接并打开； 开机预热，设置程序清洗仪器，检查加液操作是否正常； 设置蒸馏程序内的硼酸添加量、加碱量、稀释水量、蒸馏时间等参数，取10mL样液于蒸馏管中，安装至仪器蒸馏室内，拉上安全保护门，在锥形瓶内加入2-3滴混合指示剂，放置在接收室内进行蒸馏。 自动定氮仪的维护如加液的准确性，管路的清洗与维护等。 （3）滴定 取下接收瓶，用0.1 mol/L的盐酸或硫酸标准溶液滴定至终点。 滴定前 滴定终点 同时做一试剂空白实验，记录空白滴定消耗盐酸的体积。 实验注意事项—消化 （1）消化时不要用强火，应保持和缓沸腾，消化中不时转动凯氏烧瓶，以便冷凝酸液洗下附在瓶壁上的固体残渣，促进其消化完全。 （2）为加速消化，常加入 硫酸钾：可提高消化体系溶液温度 硫酸铜：催化剂、消化终点指示剂、蒸馏时碱性反应指示剂 注意事项—消化 （3）一般消化至呈透明后，继续消化3