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第32 卷 第9 期 西北农林科技大学学报 自然科学版 . 32 . 9
V o l N o
2004 年9 月 . . . . ( . . . ) . 2004
Jou r o f N o r thw e st Sci T ech U n iv o f A gr i an d Fo r N at Sci E d Sep
菌落PCR 技术在重组质粒筛选与鉴定中的应用
李 华, 刘延琳, 夏 惠, 张振文
( 西北农林科技大学 葡萄酒学院, 陕西 杨凌 7 12 100)
[摘 要] 应用以菌落为模板的聚合酶链反应(PCR ) 技术, 筛选插有酒类酒球菌苹果酸- 乳酸酶基因m leA
和苹果酸通透酶基因m leP 序列的重组阳性克隆, 筛选到的阳性克隆分别扩增到约1 600 bp 及900 bp 的条带, 且与
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两个 目的基因片段大小一致。提取阳性克隆的质粒进一步进行双酶切 及质粒 鉴定, 证明结果
E coR Kp n PCR
正确。菌落PCR 技术的应用使重组质粒的筛选和鉴定得以优化和简化。
[ 关键词] 菌落PCR ; 重组质粒; 苹果酸- 乳酸酶基因; 苹果酸通透酶基因
[ 中图分类号] 785 [ 文献标识码] [ 文章编号] 167 19387 (2004)
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苹果酸- 乳酸发酵在葡萄酒、果酒的生物降酸 连 有限公司 ; 氨苄青霉素 、
T aK aR a A m p IP T G
过程中具有非常重要的作用。苹果酸- 乳酸酶和苹 和 购 自北京鼎国生物技术发展中心。
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果酸通透酶是酒类酒球菌(O enococcus
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