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花生叶片DNA快速提取方法优化 　　摘要：以花生幼叶为试材，对高通量DNA提取法、SDS简易法、TPS法以及TENP法4种不同的DNA提取方法进行比较和优化。结果表明，与其他3种改良方法比较，改良TPS法具有不需液氮磨样、提取速度快、试剂种类少、成本低、DNA溶解速度快、质量较好的优点，提取的DNA可用于花生SSR分析。 　　关键词：花生；基因组DNA；提取方法；幼叶 　　中图分类号：S565.201文献标识号：A文章编号：1001-4942（2014）07-0011-04 　　AbstractWith the young leaves of peanut as experiment material， four different DNA extraction methods， the high-throughput DNA extraction method， the simple SDS method， TPS method and TENP method， were compared and optimized. The results showed that， compared with the other improved methods， the improved TPS method had the advantages of grinding samples with no liquid nitrogen， faster extraction rate， fewer kinds of reagent， lower cost， rapider DNA solution rate and better DNA quality. The DNA extracted through improved TPS method could be used for SSR analysis of peanut. 　　Key wordsPeanut （Arachis hypogaea L.）；Genomic DNA；Extraction method；Young leaves 　　DNA是遗传信息的载体，DNA的提取是分子生物学研究的基础。植物总DNA的提取方法主要有CTAB法[1]、高盐低pH法[2，3]、SDS法[4]等。近年来，许多研究人员根据不同的植物和不同的试验要求对传统的DNA提取方法进行改进和创新，取得了较好的效果[5，6]，但这些方法存在步骤繁琐、有机溶剂残留导致污染以及对人体造成危害等缺点。 　　李庆云等[6]研究发现，从花生不同部位提取DNA时，叶片的DNA产率最高。本研究对花生、小麦、玉米等植物叶片的4种DNA提取方法[7～10]进行改进和创新，力求寻找一种DNA质量和纯度相对较好、可用于SSR分析的快速简便的花生DNA提取方法，用于花生的遗传多样性分析、遗传图谱构建及分子标记辅助选择等研究。 　　1材料与方法 　　1.1试验材料 　　以花生品种“四粒红”的叶片为材料，由山东省花生研究所提供。 　　1.2DNA提取方法 　　分别对高通量DNA提取法[7]、SDS简易法[8]、TPS法[9]以及TENP法[10]四种简便的DNA提取方法进行改良及优化，方法如下。 　　1.2.1改良高通量DNA提取法（1）取新鲜幼叶约0.05 g，剪为0.1～0.8 cm的碎片，放入1.5 mL的EP管中，研磨棒研磨。（2）加入600 μL的Buffer A（100 mmol/L NaOH，2%Tween-20），95℃水浴10 min。（3）12 000 r/min离心10 min，取上清加入等体积的Buffer B （100 mmol/L Tris-HCl， 2 mmol/L EDTA-Na2）混匀。（4）加入预冷的等体积无水乙醇，轻轻上下颠倒混匀，置-20℃冰箱中10 min，待析出沉淀，12 000 r/min离心2 min，弃去上清液，将DNA沉淀风干，加入200 μL TE溶解DNA。4℃保存或-20℃长期保存。 　　1.2.2改良SDS简易法（1）取新鲜幼叶约0.05 g，剪为0.1～0.8 cm的碎片，放入1.5 mL的EP管中，研磨棒研磨。（2）加入600 μL DNA提取液，漩涡混匀5 s，95℃水浴10 min（提取液包含200 mmol/L Tris-HCl，250 mmol/L NaCl，25 mmol/L EDTA，0.5% SDS）。（3）12 000 r/min 离心10 min，取上清，加入等体积预冷的无水乙醇，轻轻上下颠倒混匀，置-20℃冰箱中10 min，待析出沉淀，12 000 r/min离心2 min，弃去上清液，将DNA沉淀风干，加入200 μL TE