血管紧张素Ⅱ对人心脏微血管内皮细胞神经调节蛋白1表达和分泌影响.docVIP

血管紧张素Ⅱ对人心脏微血管内皮细胞神经调节蛋白1表达和分泌影响 　　【摘要】目的：探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对人源性心脏微血管内皮细胞（HCMECs）的影响。方法：在正常培养条件下，将100 nmol/L AngⅡ加入细胞中，与HCMECs共孵育12h，用蛋白印迹法检测和细胞酶联免疫法分别检测神经调节蛋白1（NRG-1）的蛋白表达和神经调节蛋白1亚集（NRG-1β）分泌情况。结果：与空白组比较，AngⅡ处理组的NRG-1的蛋白表达和NRG-1β的分泌降低（P005）。结论：AngⅡ能减少HCMECs的NRG-1的表达和NRG-1β分泌。 　　【关键词】人源性心脏微血管内皮细胞；神经调节蛋白-1； 血管紧张素Ⅱ；表达影响 　　【中图分类号】R5416【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2015）03-0018-03 　　Abstract：Objective To study the effects of angiotensin Ⅱ （AngⅡ） on expression of neuregulin-1（NRG-1） and secretion of NRG-1β in human cardiac microvascular endothelial cells（HCMECs）.Methods Under normal culture conditions， the 100 nmol / L AngⅡ added into the HCMECs， and detected expression and secretion of NRG-1 with Western blot and ELISA after 12 hours incubation.Results In AngⅡ treatment group， the expression of NRG-1 and the secretion level of NRG-1β significantly decreased compared with the control group（P 005）. Conclusion AngⅡ could reduce the expression of NRG-1 and the secretion of NRG-1β. 　　Keywords：HCMECs；NRG-1； angiotensin Ⅱ；effect expression 　　NRG- 1是表皮生长因子家族的成员之一，是一个穿膜多肽生长因子的子集，属于表皮生长因子家族，表达于神经系统、心血管系统、乳腺、肠和肾脏。NRG- 1通过酪氨酸激酶受体（ ErbB2、 ErbB3 和 ErbB4） 介导其生物学效应，ErbB2虽然不与NRG-1直接结合，但可与ErbB3和ErbB4结合后形成异源二聚体，NRG-1可通过反式磷酸化过程引起ErbB2形成异源二聚体发生磷酸化，从而促进下游信号通路传导，激活其下游信号通路促丝裂原活化蛋白激酶和磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）途径。微血管内皮细胞是位于循环血液与组织液之间的单层上皮细胞，构成血管通透性的物理屏障，保证血管内外的物质交换。NRG-1在血管生成和心力衰竭中起着不可缺少的作用。近期研究表明[1]，聚乳酸聚乙醇酸共聚物微粒装载NRG-1和酸性纤维母细胞生长因子可以用来改善急性心肌梗死后的心脏功能，是通过增加血管生成，抑制心肌重构。 　　1材料和方法 　　11仪器与试剂人源性心脏微血管内皮细胞株（编号6000），胎牛血清25ml（编号8248），双抗（编号0106），纤维连接蛋白原液（编号0103），内皮细胞生长添加剂（编号0113），胰酶（编号0113）（上述试剂全购自美国Sciencell公司），DMEM低糖培养基（编号31600-034，购自Gibco公司），NRG-1抗体（编号MAB3771，购自美国RD公司），内参抗体GAPDH（编号FL-335：ZS25778，购自中国中杉金桥公司），人源性NRG-1β酶联免疫吸附测定法试剂盒（编号119-14819，购自美国RayBiotech公司），超低温冰箱（DW-86L388型中国海尔公司），5%CO2培养箱（编号3110，购买于美国Thermo Electron公司）。 　　12HCMECs培养细胞复苏前准备一瓶含有纤维膜的培养瓶（复苏前2h在空培养瓶25cm，加入4ml无血清的培养基，然后加入25μl纤维连接蛋白原液，放入37℃培养箱培养，培养2h以后取出液体，造纤维膜成功）取人源性心脏微血管内皮细胞株常规复苏后，本研究室常规传代培养，每瓶培养瓶都用25μl纤维连接蛋白原液，造出纤维膜，37°C、5%CO2培养。当细胞生长成单层达80