丁香醛代谢物对小鼠胚胎成纤维细胞及小鼠骨髓辐射损伤的防护作用病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

安徽医科大学硕士学位论文  PAGE 4 英文缩略词表 英文缩写 BMC英文全名 Bone marrow cell中文全名 骨髓细胞 BMNC CFE DMEM DMSO FCM IR MDA OD PBS PI Bone marrow nucleated cell Colony forming efficiency Dulbecco modified eagle medium Dimethyl solfoxide Flow cytometry Ionizing radiation Malondialdehyde Optical density Phosphate buffered solution Propidiom iodide骨髓有核细胞 克隆形成率 dulbecco 改进 eagle 培养基 二甲亚砜 流式细胞术 离子辐射 丙二醛 光密度 磷酸盐缓冲液 碘化丙啶 SDS Sodium dodecyl sulfate十二烷基磺酸钠 SOD Superoxide Dismutase超氧化物歧化酶 丁香醛代谢物对小鼠胚胎成纤维细胞及 小鼠骨髓辐射损伤的防护作用 摘要 在人类生存环境中，电离辐射时刻威胁着人们的健康，人们一直在寻求有效 的防护药物, 目前广泛应用于临床且效果满意的辐射防护药物并不多, 寻找高 效低毒活性高，不良反应少的辐射防护剂变得日益重要。国内外对辐射防护剂的 研究都比较重视，除含硫化合物外，细胞生长因子、天然药物等以外，对细胞活 素类，中草药及复方、雌激素的抗辐射作用研究也较多。 天然化合物香兰素，研究证实其具有抗氧化和抗诱变活性，清除电离辐射产 生的自由基，抑制射线诱导的 DNA 和染色体损伤等，但其作用浓度高，活性相对 较低。本实验室筛选出辐射防护作用更好的香兰素衍生物--丁香醛，已证实，丁 香醛清除电离辐射产生的自由基的效果更好，可降低 DNA 损伤，提高 DNA 损伤修 复能力以及辐射细胞存活率。丁香醛合成方便，理化性质稳定，具有开发成为新 型辐射防护药的价值。药物代谢动力学发现，丁香醛进入动物体内 10～15min 即可被机体吸收，达到血液循环的量明显低于给药剂量，在血浆里检测到大量的 丁香酸和少量的丁香醇，我们推测丁香醛进入体内发挥辐射防护作用的是其主要 代谢物--丁香酸或者两种代谢物（丁香酸和丁香醇的混合物，以下简称混合物） 协同发挥作用。本课题将从药效学部分研究，利用细胞实验观察和比较丁香醛主 要代谢物--丁香酸和混合物的辐射防护作用。利用动物实验对丁香醛的主要代谢 物--丁香酸的放射性氧化损伤和放射性造血损伤的防护作用进行研究，为丁香醛 的进一步临床应用提供实验依据。主要研究结果如下： 1.MTT 方法观察丁香醛代谢物对辐射后 MEFs 细胞效应，结果显示：和 0μmol/L 组相比，各加药组的 OD 值明显增加（p0.01），说明丁香醛代谢物能有效减轻辐 射对 MEF 细胞的损伤。 2.MTT 方法观察丁香醛代谢物对照射后的 MEFs 细胞活力，结果显示：和 IR 组相比，各加药组的 OD 值明显增加（p 0.01），说明丁香醛代谢物能够提高辐 射后的 MEF 细胞活力。  .细胞增殖实验观察丁香醛代谢物对照射后的 MEFs 细胞生长的影响，通过 绘制细胞生长曲线显示，和 IR 组相比，丁香醛代谢物能促进照射后 MEFs 细胞增 殖。 .细胞克隆形成实验检测丁香醛代谢物对照射后的 MEFs 细胞克隆形成率的 影响，结果显示：和 IR 组相比，各加药组都能够提高细胞克隆形成率，差异有 统计学意义（p 0.01），说丁香醛代谢物能提高照后 MEFs 细胞克隆形成率。 5．小鼠骨髓有核细胞计数，观察丁香酸对小鼠骨髓造血损伤的作用，与 IR 组相比较，差异有统计学意义（p 0.01），说明丁香酸对照后小鼠骨髓有核细胞 有一定的辐射保护作用，能够有效减轻小鼠骨髓造血损伤。 6.流式细胞术检测小鼠骨髓有核细胞凋亡，结果显示，与 IR 组相比较，差 异有统计学意义（p 0.01），说明丁香酸可降低辐射诱导的小鼠骨髓有核细胞凋 亡。 7.照后取小鼠骨髓和脾脏组织，处理后光镜下观察各组动物的骨髓和脾脏的 组织病理学变化，结果显示：和 IR 组相比，丁香酸组小鼠的骨髓和脾脏组织损 伤明显减轻。 8.利用试剂盒检测丁香酸对照后小鼠抗氧化损伤作用，与 IR 组相比较，丁 香酸组在照后 3d 和 6d，SOD 活性的恢复都较显著，差异有统计学意义(p 0.01)， 说明丁香酸可促进小鼠血清 SOD 活性的恢复，同时也降低了血清 MDA 的含量，与 IR 组比较有显著的差异(p 0.01)，丁香酸能够增强细胞清除自由基的能力，减 轻辐射诱发的膜脂质过氧化损伤程度，减轻细胞的