锌离子对杂交鲟幼鱼行为生理血细胞和抗氧化酶影响.docVIP

锌离子对杂交鲟幼鱼行为生理血细胞和抗氧化酶影响 　　摘要：在室内条件下，研究了锌离子对杂交鲟行为，血细胞，以及血清中抗氧化酶活性的影响。分别设置锌离子浓度0.1、0.5、1.0mg/L3个浓度处理以及1个空白对照。分别在24、48、72h3个时间段取样测定。结果表明，锌离子对杂交鲟的行为指标和血细胞有相似的影响趋势，即在24h和48h时，随着浓度的增大，杂交鲟的呼吸率和摆尾率逐渐增大，红细胞数目含量逐渐增多；但随着暴露时间的延长，杂交鲟的呼吸率、摆尾率、红细胞数目逐渐降低。锌离子对杂交鲟白细胞、抗氧化酶活性的作用表现出一定的剂量效应：即白细胞和3种抗氧化酶活性均随着锌离子浓度的增加表现出先升高后降低；同一浓度下，随锌离子作用时间的延长，白细胞和抗氧化酶活性明显降低。说明锌离子低浓度时对杂交鲟抗氧化酶活性和免疫细胞有明显的诱导作用，高浓度时则抑制其免疫和抗氧化功能。 　　关键词：锌离子；杂交鲟；行为指标；血细胞；抗氧化酶 　　中图分类号：S965.215；S917文献标志码：A文章编号：1002-1302（2014）11-0256-03 　　锌是水生动物必需的一种微量元素，它参与了动物有机体多种金属酶的激活和形成，在骨骼发育、生殖、免疫和生物膜稳定等生理机能中担负重要角色[1]。锌又是有毒重金属元素，过量的锌会在体内富集，对蛋白质和酶产生毒害作用[2]。关于锌离子对鱼类行为和生理功能的影响国内外已有一些报道，但不同浓度的锌离子对不同种鱼类的影响程度却不尽相同[3-7]。鲟鱼（Sturgeon）隶属于硬骨鱼纲（Dsteichthyes）鲟形目（Acipenseriformes），是当今最具经济价值的大型优质珍稀鱼类之一[8]。其中杂交鲟[欧洲鳇（HusohusoLinnaeus）×小体鲟（AcipenserruthenusLinnaeus）]由于其具有容易饲养、耗饲少、抗病虫害能力强、成活率高、生长速度快、饲料耗用系数少等优势，成为我国主要的养殖鲟类[9]。目前，杂交鲟的人工养殖和基础生理学已有相当的研究[9-11]，但重金属离子对其生理生化影响的研究还不多见。本试验以不同浓度重金属锌离子对杂交鲟进行处理，研究其行为和生理指标的变化规律，以期对鲟鱼养殖以及判断养殖水体中污染物的毒性提供依据。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　本试验于2013年6―7月在河北农业大学海洋学院科研中心育苗室进行。试验用鱼为从河北省秦皇岛市海浪花市场购买的杂交鲟幼鱼，选择健康活跃且规格相近的幼鱼140尾作为试验用鱼[体质量（762.0±49.3）g，体长（59.7±1.1）cm]。试验在聚乙烯塑料水族箱（100cm×78cm×60cm）进行。试验前供试鲟鱼在室内静水中驯养5d以上。试验期间连续充气，保持充足的氧气（≥6.0mg/L）和恒定的水温[（20.0±1.0）℃]，pH值7.2～7.4。 　　1.2试验设计 　　采用静水法对杂交鲟进行染毒处理。用分析纯的硫酸锌配成1mg/mL的母液。根据杂交鲟96hLC50值确定试验浓度。试验设定锌离子0.1、0.5、1.0mg/L3个离子梯度组和1个空白对照组（0mg/L），每梯度组均设9个平行组。试验开始后于24、48、72h时取样，每阶段每梯度组水箱取9尾鱼作为样品。 　　1.3测定指标及方法 　　1.3.1行为生理指标 　　使用摄像机从实验水槽正上方拍摄鱼的游泳行为，每次拍摄持续600s，然后将所拍录像转换成MPEG4视频文件在计算机上分析摆尾频率和呼吸频率[12]。 　　用摄像机观察的方法记录一定时间内杂交鲟的摆尾次数和鳃张合次数，即可计算摆尾率（TBF）和呼吸频率（RF）。计算公式为： 　　1.3.2血液指标 　　用浸润过肝素钠的注射器从鱼体尾动脉中采血，用染色稀释法镜检计数红白细胞。 　　1.3.3抗氧化酶 　　超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和丙二醛（MDA）的测定采用南京建成生物工程研究所的试剂盒进行测定，具体测定方法按照试剂盒的说明进行。超氧化物歧化酶（SOD）活力测定采用羟胺法，过氧化氢酶（CAT）活性采用钼酸铵显色测定法，丙二醛（MDA）采用TBA法。 　　1.4数据处理 　　试验数据用Excel进行常规计算后，用SPSS17.0进行统计分析。数据均用平均值±标准差表示，对各组数据的差异采用单因素方差分析并进行Duncan氏多重比较。 　　2结果 　　2.1锌离子对杂交鲟行为的影响 　　锌离子处理杂交鲟后其呼吸频率的变化见表1。同一时间内，24h和48h时0.1mg/L处理组和对照组差异不显著（P0.05），0.5mg/L和1mg/L处理组之间差异不显著（P0.05），但均显著高于对照组和0.1mg/L处理组（P0.05），但