钙和水杨酸对低温下黄瓜幼苗抗氧化酶同工酶影响.docVIP

钙和水杨酸对低温下黄瓜幼苗抗氧化酶同工酶影响 　　摘要： 以黄瓜品种津绿11号为试验材料，采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，研究了外源叶面喷施2 mmol/L CaCl2和1 mmol/L SA预处理对低温下黄瓜幼苗抗氧化酶同工酶的影响。结果表明：喷施2 mmol/L CaCl2对低温处理下的黄瓜幼苗SOD和POD同工酶酶带的条数和强度没有明显影响，但明显增强了CAT同工酶酶带的强度；喷施1 mmol/L SA明显增强了低温处理下黄瓜幼苗的SOD1～SOD4、POD1、POD3～POD 6、CAT1和CAT2酶带。暗示钙和SA通过影响抗氧化酶同工酶表达参与黄瓜植株低温耐性的调节。 　　关键词： 钙；水杨酸；低温；黄瓜；抗氧化酶；同工酶 　　中图分类号： S642.201 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2016）03-0168-03 　　黄瓜（Cucumis sativus L.）是我国温室栽培的主要蔬菜作物之一，黄瓜属喜温性作物，对低温反应很敏感[1]，在冬春设施栽培期间经常遭受不同程度的低温胁迫，对黄瓜植株的生长、光合、碳和氮的代谢、酶活性和干物质积累产生不同程度的影响。植物体内存在的超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、过氧化物酶（peroxidase，POD）和过氧化氢酶（catalase，CAT）等有助于植物抵御不良环境造成的活性氧伤害。Ca2+既是细胞的结构物质，又是耦联胞外信号与胞内生理生化反应的第二信使，在调控温度、水分以及盐胁迫下植物防御生理响应方面具有重要作用[2]。钙能提高逆境下植物组织或细胞的抗性，可提高辣椒（Capsicum annuum L.）幼苗的抗寒性[3]，降低低温胁迫下水稻（Oryza sativa L.）幼苗的丙二醛含量[4]，增强茄子（Sloanum melongena）幼苗抗膜脂过氧化能力[5]。水杨酸（salicylic acid，SA）是植物体内普遍存在的一种小分子酚类物质，在诱导植物抗病性、信号转导、激活植物过敏反应和系统获得性抗性等方面起着重要的调节作用[6]。外源SA能够缓解低温胁迫对黄瓜植株生长的抑制作用[7]。本试验以黄瓜幼苗为材料，研究了外源钙和SA预处理对低温下黄瓜幼苗抗氧化酶同工酶的影响，探讨钙和SA对黄瓜幼苗低温耐性的调节机制，以期为提高设施蔬菜作物低温耐性提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料和处理 　　供试黄瓜品种为津绿11号（天津市绿丰园艺新技术开发有限公司），购自河南省商丘市种子公司。在商丘师范学院玻璃温室内培育黄瓜幼苗。黄瓜种子经温汤浸种并催芽后，于50孔穴盘中育苗，2叶1心时，定植于13 cm×12 cm软塑料营养钵中，3叶1心时将黄瓜幼苗随机分成3组，每组30株，分别进行以下不同处理。试验共设3个处理：（1）低温：将黄瓜幼苗放入人工气候箱进行低温处理，处理条件为：昼/夜温度为15 ℃/8 ℃；光/暗时间为12 h/12 h。（2）低温+2 mmol/L CaCl2：记作2 mmol/L Ca2+，在低温处理黄瓜幼苗前叶面喷施CaCl2水溶液。（3）低温+1 mmol/L SA：记作 1 mmol/L SA，在低温处理黄瓜幼苗前叶面喷施SA水溶液。CaCl2和SA处理：采用叶面喷施法进行预处理，分别于低温处理开始前60、48、36、24 h喷施4次，处理（1）同时喷施等体积的水，叶片正反面均喷到。所有处理均添加0.01%吐温。 　　低温处理4 d时，取黄瓜幼苗生长点下面第2张展开叶进行SOD、POD和CAT同工酶电泳。试验重复3次。 　　1.2 同工酶电泳 　　1.2.1 酶液提取 SOD、POD和CAT同工酶电泳采用同样的酶提取液。取黄瓜幼苗叶片0.4 g加1.5 mL磷酸钠缓冲液（0.05 mol/L，pH值7.8，内含0.1 mmol/L EDTA和1% PVP），冰浴研磨至匀浆。以4 ℃、12 000 r/min离心20 min，取上清液，即得SOD、POD和CAT酶液，用于SOD、POD和CAT同工酶电泳。 　　1.2. 2 同工酶电泳 SOD、POD和CAT聚丙烯酰胺同工酶电泳采用垂直板电泳槽进行，分离胶浓度为10%，浓缩胶浓度为3.75%，在浓缩胶中稳定电压为90 V，进入分离胶后稳定电压为200 V，3～4 h完成电泳。SOD同工酶电泳采用邻联（二）茴香胺法[8]进行染色；POD同工酶电泳采用醋酸联苯胺法[9]进行染色；CAT同工酶电泳在分离胶中加入总体积 0.5% 的可溶性淀粉，并采用H2O2-KI法[10]进行染色。 　　2 结果与分析 　　2.1 钙和SA对低温下黄瓜幼苗SOD同工酶的影响 　　从图1可以看出，低温处理的黄瓜幼苗SOD同工酶显现出SOD