银屑病患者外周血白细胞膜CD14及血浆可溶性CD14表达临床意义分析.docVIP

银屑病患者外周血白细胞膜CD14及血浆可溶性CD14表达临床意义分析 　　【摘要】 目的：探讨银屑病（PSG）患者外周血白细胞膜CD14及血浆可溶性CD14表达的临床意义分析。方法：选择36例寻常性PSG患者（PSG组）和52例健康体检者（健康对照组），观察和比较两组外周血白细胞mCD14及sCD14表达水平。结果：PSG组患者外周血白细胞膜联mCDl4的表达水平为（6.20±2.20）%，其中进行期、静止期分别为（7.30±2.40）%、（4.70±2.20）%，均较健康对照组明显增高（P0.01）。PSG组患者外周血白细胞膜sCD14的浓度平均为（1.39±0.38）μg/mL，其中进行期、静止期分别为（1.42±0.39）μg/mL、（1.21±0.44）μg/mL，均较健康对照组显著增高（P0.01）。结论：外周血白细胞膜CD14及血浆可溶性CD14对银屑病的发病机制、临床诊断等均有重要的意义。同时有助有于进一步探讨PSG发病机制。 　　【关键词】 外周血白细胞膜CD14； 血浆可溶性CD14； 银屑病； 表达； 皮损 　　银屑病（Parapsoriasis guttata，PSG）属于一种多发性慢性炎症性皮肤病，往往病程迁延，反复发作。病理研究发现，PSG是在多基因遗传条件下T细胞功能异常导致的免疫性疾病[1-2]。PSG发病机理与免疫力、细菌或病毒感染、遗传因素、神经递质及精神状态等关系密切。细菌感染是诱发PSG加重的一个重要因素。研究表明，革兰阴性杆菌是导致部分慢性炎症的主要致病菌，此类阴性杆菌长期大量生长及死亡，释放、裂解出细胞壁脂多糖即内毒素，能够扩张血管，增高中性粒细胞及血管通透性，并激活补体[3]。内毒素组成主要是脂多糖，脂多糖与内毒素受体膜联CD14（mCD14）、Toll样受体（TLR4）、MD-2等受体复合物相结合，可激活细胞信号传导通路，进而激活核因子KB（NFKB），生成肿瘤坏死因子、IL-6、IL-8及干扰素γ等炎症因子[4]。此类炎症因子在PSG发病过程中发挥重要作用[5-6]。因此，脂多糖及其信号通路在PSG发病过程扮演重要角色。本研究测定了PSG患者外周血白细胞mCD14及血浆中可溶性CD14（soluble CD14，sCD14）的表达，以分析内毒素信号转导通路激活与PSG的相互关系。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 选择2009年5月-2012年5月于本院门诊诊治的寻常性PSG患者36例（PSG组），均符合第3版《临床皮肤病学》相关诊断标准，临床症状典型。男22例，女14例，年龄23～53岁，平均（35.4±7.1）岁，病程7个月～18年，平均（2.7±1.1）年。以严重性指数（PASI）及PSG皮损面积对PSG患者病情状态进行评估[4]。其中，进行期20例（55.6%），静止期16例（44.4%）。入选患者最近1个月内未接受过药物如糖皮质激素、抗生素、免疫抑制剂及光化学药物系统疗法，肝肾功能均正常；选择同期在本院行常规健康体检并检查合格的志愿者（健康对照组）52例，男29例，女23例，年龄21～56岁，平均（36.1±8.4）岁。两组性别、年龄等一般资料比较差异无统计学意义（P0.05），具有可比性。 　　1.2 方法 　　1.2.1 外周血白细胞表面mCD14表达的检测 　　1.2.1.1 两组全血标本的采集 两组均采集3 mL静脉血，以乙二胺四乙酸（EDTA）-K2为抗凝剂。 　　1.2.1.2 直接法免疫荧光标记 按使用说明书及实际样本量配制所需量的试剂。取100 μL EDTA抗凝的人外周静脉血，添加20 μL的荧光抗体抗mCD14-APC，混和均匀，避光孵育30 min。添加2 mL红细胞溶解液并混合均匀，室温条件下孵育10 min，至孵育液完全澄清透明。1000 rpm离心5 min，弃上清，将细胞悬浮在约0.5 mL的4%多聚甲醛溶液中，振荡混匀后以流式细胞仪（美国guava）进行检测。 　　1.2.1.3 使用同型对照荧光测定阴性范围 完成各通道之间荧光补偿值设置后，依次进行标本检测，作CD14荧光的直方图，应用CellQuest软件对检测结果进行分析。 　　1.2.2 血浆中sCD14水平的检测 　　1.2.2.1 血浆标本采集 上述实验过程中剩下的EDTA抗凝血样本，在2000 rpm条件下，离心8 min获得血浆，保存于-80 ℃直至检测。 　　1.2.2.2 ELISA检测 取出酶标板，每孔中加入100 μL的抗体稀释液。之后添加100 μL的标准品、样品及对照品，混合均匀，每样本作为2个复孔。室温条件下孵育3 h后吸干孔中的液体，加入300 μL洗液洗涤，反复4次。每孔中添加200 μL的sCD14酶结合物，室温条件下