携带荧光素酶基因肝癌细胞株的构建及在肝癌原位-中国科技论文在线.PDFVIP

中国科技论文在线 携带荧光素酶基因肝癌细胞株的构建及在 肝癌原位移植瘤模型中的应用# 翟向明，雷川，梁芷冰，李红卫，杜红延** 5 （南方医科大学检验与生物技术学院，广州 510515 ） 摘要：目的构建含有双报告基因的荧光素酶重组慢病毒载体并建立稳定表达荧光素酶基因 的人肝癌细胞株，建立可实时观察的肝癌原位移植瘤模型，为肝癌及转移分子机制以及治 疗的相关研究奠定基础。方法 采用限制性内切酶酶切、T4 DNA 连接酶连接等方法，将萤 10 光素酶基因插入慢病毒载体 pTYF-CMV-RFP-PGK 中，构建含有双报告基因的慢病毒载体 pTYF-CMV-LUC-2A-RFP-PGK ，经酶切鉴定后，利用慢病毒三质粒系统磷酸钙共转染HEK 293T 细胞，收集纯化病毒，转导肝癌细胞SMMC7721，嘌呤霉素(puromycin)结合有限稀释