银杏达莫注射液对血管性痴呆大鼠学习记忆及海马区神经元干预作用.docVIP

银杏达莫注射液对血管性痴呆大鼠学习记忆及海马区神经元干预作用 　　[摘 要] 目的：观察银杏达莫注射液对血管性痴呆大鼠的学习记忆及海马区神经元干预作用。 方法：大鼠分为三组：假手术组、安慰剂组、银杏达莫组。采用改良双侧颈总动脉阻断方法制备血管性痴呆大鼠模型。利用Morris水迷宫评价大鼠的学习记忆能力，显微镜观察海马区CA1区神经元的组织形态结构。结果：与假手术相比，安慰剂组大鼠平均逃避潜伏期明显延长（P0.05），而银杏达莫组大鼠平均潜伏期较安慰剂组明显减少（P0.05）。形态学观察显示安慰剂组大鼠海马CA1区神经细胞排列紊乱、数量较少，甚至神经细胞坏死、凋亡。银杏达莫组大鼠海马CA1区神经元数目、形态较安慰剂组均有明显改善。结论：银杏达莫注射液对VD大鼠海马CA1区神经细胞具有保护作用，从而改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力。 　　[关键词] 血管性痴呆；大鼠；银杏达莫；海马区；学习记忆 　　中图分类号：R285.5 文献标识码：B 文章编号：2095-5200（2015）06-030-03 　　DOI：10.11876/mimt201506012 　　血管性痴呆（Vascular dementia，VD）是指各种脑血管疾病引起脑功能障碍而产生的获得性智能损害综合症，以高级神经认知功能障碍，如学习记忆、认知功能受损等为主要表现，可伴有一系列异常神经心理症状和精神行为，是继阿尔茨海默病之后第二大痴呆疾。VD可以防治，早期治疗，具有可逆性[1-2]。目前，已有文献报道：银杏达莫注射液具有改善脑部微循环、营养神经、清除自由基、抑制神经细胞凋亡，改善由于脑缺血引起症状和记忆功能等功效[3]。银杏达莫注射液对血管性痴呆具有较好临床疗效，但机制研究证据较少。本研究在动物模型上观察银杏达莫注射液对血管性痴呆治疗效果及可能的治疗机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料 　　实验对象为健康雄性SD大鼠，数量30只，体重在250～300g，SPF级。OPJ-1B型切片机由天津天利航空机电有限公司生产；80i正置显微镜由日本Nikon生产；Morris水迷宫由中国医学科学院药物研究所研制生产。银杏达莫注射液（国药准字，由贵州益佰制药股份有限公司生产。 　　1.2 实验方法与分组 　　SD大鼠经1周适应性饲养，采用Morris水迷宫筛选实验动物，淘汰不能胜任水迷宫大鼠。将符合要求大鼠随机选出20只，改良双侧颈总动脉阻断方法制备血管性痴呆动物模型，余下10只为假手术组，给予相应手术处理但不阻断双侧颈总动脉。手术死亡大鼠剔除实验，并补充相应数目大鼠。术后第2天将造模大鼠，随机分为2组：银杏达莫组给予银杏达莫注射液（剂量为2.7mg/kg）静脉注射 [4]，安慰剂组、假手术组给予等体积生理盐水静脉注射，疗程为2周[5]。治疗结束后，利用Morris水迷宫装置对各组大鼠进行定位航行试验，记录各组大鼠逃避潜伏期。 　　1.3 制备血管性痴呆动物模型 　　改良双侧颈总动脉（CAA）阻断法制备血管性痴呆模型[6]。术前12h禁食，10%水合氯醛（350mg/kg体重）腹腔麻醉，取仰卧位，固定于手术台上；行相关手术前准备，颈部正中切口，依次切开皮肤、皮下组织，分离肌肉、血管、神经，充分暴露一侧颈总动脉，给予结扎、剪断该血管；依次缝合肌肉、皮下组织及皮肤。间隔7天后，同样方法再次处理对侧颈总动脉。 　　1.4 大鼠学习记忆能力测定 　　利用Morris水迷宫对各组大鼠进行学习记忆评估[7]。定位航行实验（水下任务实验），记录大鼠从入水至爬上平台时间，即逃避潜伏期。逃避潜伏期长短可以客观反映大鼠空间学习记忆能力。连续进行5天定向航行试验，每日4次（上午、下午各2次）。大鼠第5天4次平均逃避潜伏期为该大鼠最终测试时间。 　　1.5 大鼠脑组织HE切片 　　大鼠经10%水合氯醛（350mg/Kg）腹腔麻醉，经心脏灌注生理盐水50mL，再用含2%多聚甲醛、1%戊二醛混合液100～250mL灌注固定，时间不超过6min，1h后取脑，每个标本放入4%多聚甲醛PBS溶液中固定4～6h，沿矢状位切成小块，在30%蔗糖溶液中脱水12h后包埋于石蜡中。采用苏木素-伊红（HE染色）脑组织切片，光学显微镜下（×400）观察海马CA1区神经细胞形态及数目。 　　1.6 统计学处理 　　应用SPSS18.0统计软件进行相关数据统计学分析，数据用x±s表示。 　　2 结果 　　2.1 三组大鼠症状表现 　　双侧颈总动脉假阻断术后当日大鼠表现为运动减少、进食及饮水较少，之后逐渐恢复。术后2周时假手术组大鼠表现为进食水、活动及精神状态、毛发光泽度恢复至术前水平。安慰剂组表现为大鼠进食、饮水逐渐恢复，目光迟钝，活动量较术前明显减少