马齿苋多糖对小鼠大脑神经细胞代谢损伤修复机制研究.docVIP

马齿苋多糖对小鼠大脑神经细胞代谢损伤修复机制研究 　　摘要：为探讨马齿苋多糖（Ｐｏｒｔｕｌａｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＰＯＰ）对小鼠大脑神经细胞代谢损伤的修复保护机制，采用原代培养小鼠大脑神经细胞的方法，分别用２０ μｍｏｌ／Ｌ的β淀粉样蛋白（β－ａｍｙｌｏｉｄ，Ａβ）处理原代培养细胞、２０ μｍｏｌ／Ｌ的Ａβ加１０ ｍｍｏｌ／Ｌ的ＰＯＰ共同处理原代培养细胞；对处理的原代细胞进行倒置相差显微镜观察与ＰＩ－Ｈｏｃｈｅｓｔ双染色成活分析，用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测处理后的原代细胞Ｐ３５和Ｐ２５条带的表达；ｐＥＧＦＰ－ｔａｕ－ｓ３和ｐｃＤＮＡ－ＧＳＫ－３β转染原代培养细胞，ｐＥＧＦＰ－ｔａｕ－ｓ３和ｐｃＤＮＡ－ＧＳＫ－３β加ＰＯＰ共同转染原代培养细胞，４８ ｈ后荧光观察和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测ＧＳＫ－３β的表达。结果显示，倒置相差显微镜下经２０ μｍｏｌ／Ｌ Ａβ处理的原代培养细胞出现了皱缩，部分细胞死亡；经ＰＩ－Ｈｏｃｈｅｓｔ双染色细胞成活分析，Ａβ和ＰＯＰ共同处理的原代培养细胞成活率明显高于只用Ａβ处理的原代培养细胞；Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测到Ａβ处理的细胞出现了Ｐ２５条带，而Ａβ加ＰＯＰ共同处理的细胞Ｐ２５条带明显减弱；Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测发现，ｐＥＧＦＰ－ｔａｕ－ｓ３和ｐｃＤＮＡ－ＧＳＫ－３β与ＰＯＰ共转染的细胞中，其ｔａｕ蛋白的迁移率高于只转染ｐＥＧＦＰ－ｔａｕ－ｓ３和ｐｃＤＮＡ－ＧＳＫ－３β的细胞ｔａｕ迁移率。所以ＰＯＰ对小鼠大脑原代培养细胞Ａβ损伤有修复保护作用，并能减少Ｐ３５到Ｐ２５的裂解和ＧＳＫ－３β对ｔａｕ的磷酸化。 　　关键词：马齿苋多糖；小鼠；大脑神经细胞；β淀粉样蛋白；ｔａｕ蛋白；修复机制 　　中图分类号：Q539；S865.1+3；Q954.67文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０11）02－0353-05 　　 　　The Metobolism Regenerating Mechanism of Portulaca oleracea Polysaccharide 　　on Mouse Brain Neurons 　　 　　ＫＡＮＧ Ｊｉｅ 　　（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｓｈａｎｇｑｉｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｓｈａｎｇｑｉｕ ４７６０００，Ｈｅｎａｎ，Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｉｍａｒｙ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ｂｒａｉｎ ｎｅｕｒｏｎｓ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ｄｉｓｃｕｓｓ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Pｏｒｔulａｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ （ＰＯＰ） ｏｎ ｔｈｅ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｄａｍａｇｅ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ｂｒａｉｎ ｎｅｕｒｏｎｓ．． Ｔｈｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ２０ μｍｏｌ／Ｌ β－ａｍｙｌｏｉｄ（Ａβ）， ａｎｄ ｗｉｔｈ ２０ μｍｏｌ／Ｌ Ａβ ｐｌｕｓ １０ mｍｏｌ／Ｌ ＰＯＰ ｃｏｍｂｉｎｅｄ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｐｒｉｍａｒｉｌｙ－ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｕｎｄｅｒ ａｎ ｉｎｖｅｒｔｅｄ ｐｈａｓｅ ｃｏｎｔｒａｓｔ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ． Ａｆｔｅｒ ｂｅing ｄｏｕｂｌｅ－ｓｔａｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ＰＩ－Ｈｏｃｈｅｓｔ， ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ rate ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ． Ｔｈｅ Ｐ３５ ａｎｄ Ｐ２５ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｐｒｉｍａｒｉｌｙ－ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ａｐｐｌｙｉｎｇ Wｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ． Ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｐｒｉｍａｒｉｌｙ－ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｂｙ ｐＥＧＦＰ－ｔａｕ－ｓ３ ａｎｄ ｐｃＤＮＡ－ＧＳＫ－３β， ａｎｄ ｂｙ ｐＥＧＦＰ－ｔａｕ－ｓ３， ｐｃＤＮＡ－ＧＳＫ－３β ｐｌｕｓ ＰＯＰ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． ４８ ｈ ａｆｔｅｒ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ， ｔｈｅｓｅ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｕｎｄｅｒ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＧＳＫ－３β ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ａｐｐｌｙｉｎｇ Wｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐｒｉ