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DNA重组技术的基本工具 复习： DNA分子的结构：（磷酸二酯键） 基因概念： 基因在染色体上排列特点： 基因的功能： 基因的结构： 2.来源 大肠杆菌中分离的 E.coliDNA连接酶 只能连接黏性末端 T4噬菌体中提取的 T4DNA连接酶 两种末端都可以连接 * 基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过体外DNA重组 和转基因 等技术,赋予生物以新的遗传特性,创造出符合人们需要的新的生物类型 和生物产品。又叫做DNA重组技术 。 （一）基因工程的概念 实质（原理） 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 定向地改造生物的遗传性状，产生人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基因重组 一种限制酶只能识别一种特定脱氧核苷酸序列；并在特定位点切割。 一. 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” （二） 基因工程的基本工具 1、来源： 2、种类： 3、作用： 主要是原核生物 4000种。 4、作用实质： 断开磷酸二酯键 5、结果： 形成两种末端 粘性末端 平末端 识别序列 SmaI限制酶 ＥcoRI限制酶 －ＣＣＣＧＧＧ－ 切割位点 Ｇ和Ａ之间 Ｃ和Ｇ之间 未端类型 平末端 粘性末端 －ＣＴＴＡＡＧ－ －ＧＧＧＣＣＣ－ －ＧＡＡＴＴＣ－ 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？ 要切两个切口，产生四个黏性末端。 　被同一种限制酶切断的几个来源不同的DNA是否具有相同的黏性末端？ 两个不同的ＤＮＡ的黏性末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 被同一种限制酶切断的几个DNA具有相同的黏性末端。 二. DNA连接酶——“分子缝合针” 1.作用： 把两条ＤＮＡ末端之间的缝隙“缝合”起来，恢复断开了的磷酸二酯键。 3.DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同和不同点？ （1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的末端上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。 （2）DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。因此DNA连接酶不需要模板。 此外，二者虽然都是由蛋白质构成的酶，但组成和性质各不相同。 三、基因进入受体细胞的载体——”分子运输车” １、作用：将外源基因导入受体细胞 ２、特点（条件） 1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存 2、有适宜的限制性内切酶酶切位点，最好是对多种限制性内切酶有单一切点 3、具有标记基因，便于进行筛选 4.对受体细胞无害 ３、常用的运载体： 质粒（最常用）、 λ噬菌体的衍生物和动植物病毒等 质粒:是一种裸露的,结构简单,独立于细菌染色体之外,并具有自我复制 能力的双链环状 DNA 分子。 “分子运输车” “基因缝合针” “分子手术刀” 根据切点不同，分类不同 备注 自我复制 多酶切位点 有标记基因 对受体细胞无害 两种DNA连接酶作用性质稍有差别 专一性 特点 运载目的基因进入受体细胞 连接同一种限制酶的切口 （实质：恢复被限制酶切开的磷酸二酯键） （与DNA聚合酶进行区别） 错位切：产生黏性末端 平切：产生平末端 作用 环状DNA分子（质粒） 蛋白质 蛋白质 化学本质 细菌质粒、噬菌体、动植物病毒等 大肠杆菌、 T4噬菌体 原核生物 来源 载体 DNA连接酶 限制性内切酶 工具 识别特定脱氧核苷酸序列，并在特定位点切割 （实质：断裂磷酸二酯键） 在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ） Ａ．同种限制酶 B. 两种限制酶 Ｃ．同种连接酶 D. 两种连接酶 练习 Ａ 注意：要用同一种限制酶切取目的基因和运载体，并用DNA连接酶连接。 不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 （ ） B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA D 练习 双基练习： 一、基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过体外DNA重组 和转基因 等技术,赋予生物以新的遗传特性,创造出符合人们需要的新的生物类型 和生物产品。又叫做DNA重组技术 。 二、DNA重组技术的基本工具 1.限制性核酸内切酶-----”分子手术刀” (1)主要来源:从原核生物中分离出来的. (2)特点:能够识别DNA特定的核苷酸序列,切开 *