鼻息肉术后囊泡组织中微血管密度及血管内皮生长因子在上皮化进程中表达及意义.docVIP

鼻息肉术后囊泡组织中微血管密度及血管内皮生长因子在上皮化进程中表达及意义 　　[摘要]目的：探讨微血管密度（MVD）和血管内皮生长因子（VEGF）在鼻息肉患者鼻内镜术后囊泡组织中的表达及意义。方法：选取40例慢性鼻息肉患者（80侧）为研究对象，实验组为术后鼻腔刮除的囊泡组织，对照组为术中鼻息肉组织、下鼻甲组织，比较各组MVD和VEGF阳性区域平均光密度的表达水平，并分析二者在囊泡组织中的相关性。结果：MVD在鼻息肉组织、囊泡组织及下鼻甲组织中依次增高，各组之间比较差异有统计学意义（P0.05）；VEGF的阳性区域的平均光密度在鼻息肉组织、囊泡组织及下鼻甲组织中依次降低，各组之间比较差异有统计学意义（P0.05）；囊泡中MVD与VEGF阳性区域的平均光密度呈负相关。结论：MVD和VEGF的动态变化可以作为鼻内镜术后粘膜预后转归的监测指标。 　　[关键词]鼻息肉；MVD；VEGF；免疫组化；功能性鼻内镜手术 　　[中图分类号]R765.25 　　[文献标志码]A [文章编号]1008-6455（2016）02-0037-03 　　慢性鼻鼻窦炎（伴鼻息肉）为鼻部常见病、多发病，其发病与多种因素有关，其中血管的形成、细胞因子等在鼻息肉的发病和形成中发挥着重要作用。VEGF是己知的最强的血管通透因子，有研究认为鼻粘膜血管通透性增加是导致鼻息肉组织水肿的重要原因，但VEGF在鼻粘膜炎症调节过程中的表达、诱生、调控因素等诸方而的研究尚不清楚，鼻息肉术后术腔的囊泡组织是影响患者恢复的重要因素，需在内窥镜下定期清理，才能使术腔完成上皮化过程。虽然现在认为术腔囊泡等的增生是鼻内窥镜术腔转归的必经阶段，但其产生的生物学机制并不清楚。本研究检测MVD及VEGF的表达，以探讨其对鼻息肉术后囊泡组织的MVD及VEGF的表达对鼻腔粘膜上皮化进程的影响。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 病例及标本：病例选自笔者所在医院耳鼻咽喉头颈外科2014年3月至8月行鼻内镜手术，术后定期随访且有粘膜囊泡、肉芽组织增生的慢性鼻窦炎（双侧，伴鼻息肉）患者40例（80侧）其中男23例，女17例，年龄16-72岁，平均38.5岁。全部病例根据慢性鼻窦炎、鼻息肉诊断和治愈标准（2007 EPOS标准）纳入。所有病例统一手术方式及术前术后用药（口服或静脉抗生素、糠酸莫米松喷鼻及鼻腔冲洗），均在鼻内镜下换药。术后换药以术后14周内作为研究期限。术后换药并取鼻腔囊泡组织，同时取12例正常下鼻甲做对照组。 　　1.1.2 试剂与仪器：鼻内镜手术及监视系统采用Storz系统，VEGF鼠抗人单克隆抗体、及二步法免疫组化检测试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。光镜及免疫组化摄影采用OLYMPUS BH2型摄影生物显微镜等。 　　1.2 方法 　　1.2.1 标本采集：分别在留取术中下鼻甲组织、鼻息肉组织以及术后鼻内镜复查时的鼻腔囊泡组织，均经10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，做成5μm厚切片，行伊红（HE）染色。 　　1.2.2 　　MVD的计数：选取VEGF染色丰富的区域，每张切片在400倍镜下随机选取5个视野计数微血管数目，取平均值。 　　1.2.3 细胞因子VEGF免疫组织化学检测：VEGF采用免疫组织化学SP法染色，染色操作步骤按照试剂盒说明书进行，以PBS替代一抗设立阴性对照， 以已知的阳性组织片作为阳性对照。图像采集利用OLYMPUS BH2型摄影生物显微镜，在40倍接物镜下，选取阳性细胞集中的视野，调整图像效果，使图像的背底光密度一致。结果判定：阳性细胞可见棕黄色颗粒定位于细胞质或细胞膜。并采用ImageProPlus6.O软件进行图像分析，测量免疫组化切片的阳性而积和积分光密度，通过阳性区域的平均光密度比较阳性表达的强弱。 　　1.2.4 统计学方法：数据以x±s表示均数和标准差，选用SPSS13.O统计分析软件对数据行正态分布检验和方差分析；相关性采用Pearson相关分析；PO.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 光镜下囊泡组织均为假复层纤毛柱状上皮，一部分组织表现为上皮剥蚀，基底膜不连续，细胞间隙宽，间质内大量红细胞、大量嗜酸性粒细胞浸润、固有层水肿，上皮下层嗜酸性粒细胞浸润（见图IA）；-部分表现为上皮层完整连续，上皮层可见杯状细胞、嗜酸性粒细胞；纤毛柱状上皮增多，腺体导管内及血管周围可见嗜酸性粒细胞等浸润（见图IB）。 　　2.2 MVD在三组组织中的表达情况，MVD在鼻息肉组织、囊泡组织及下鼻甲组织中依次增高，各组之间比较差异有统计学意义（PO.05，见表1）。 　　2.3 免疫组化染色结果显示，VEGF主要定位于囊泡组织基底膜周围的炎性细胞和上皮细胞以及腺体、血管周围和血管壁内皮细胞（