放线菌发酵制药-2011年6月23日课件.ppt

学习情境三放线菌发酵制药;子学习情境3.1  四环素发酵;任务一 发 酵 准 备;一、发酵罐的清洗;2、发酵罐的清洗 从接种孔加入70L左右的清水，启动搅拌，转速为100r/min左右，用蒸汽加热清水至121℃左右，搅拌30min左右，以此清洗发酵罐。清洗完毕，利用空气压力排出洗水，并用空气吹干发酵罐。 ;二、发酵设备检查;三、发酵设备灭菌;关于灭菌和消毒的不正确的理解是（ ） A．灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细 胞、芽孢和孢子 B．消毒和灭菌实质上是相同的 C．接种环用灼烧法灭菌 D．常用灭菌的方法有加热法、过滤法、紫外 线法、化学药品法;2、灭菌方法： 干热灭菌、湿热灭菌、物理灭菌（射线、微波等）、化学灭菌（各种化学药品）； 干热灭菌法 灼烧灭菌、在电热或红外线在设备内加热 主要用于保持干燥的物料、器具等;湿热灭菌法 借助蒸汽释放的热使微生物细胞中的蛋白质、酶和核酸分子内部的化学键，特别是氢键受到破坏，引起不可逆的变性，使微生物死亡。 优点：1）蒸汽来源容易，操作费用低廉，本身无毒 2)蒸汽具有很强的穿透力，灭菌彻底 3）蒸汽输送可借助本身的压强，调节方便，技术管理容易 缺点：1)设备费用高 2）不能用于怕受潮的物料灭菌;射线灭菌 紫外线 化学药品灭菌法 表面消毒剂 高锰酸钾溶液：0.1～0.25%、漂白粉 、75％的酒精、新洁尔灭和杜灭芬、甲醛 37％、戊二醛、过氧乙酸、焦碳酸二乙酯、酚类;3、发酵罐灭菌（空消） 灭菌压力：0.147—0.18MPa，45—60min。 注意事项： 空消后，先用无菌空气保压，灭菌的培养基、相关物料输入罐内后，打开冷却系统进行冷却。;4、附属设备的灭菌;任务二 种子制备;一、培养基配制;2、种子培养基（g/L） 黄豆饼粉 20 淀粉 40 酵母粉 5 蛋白胨 5 MgSO4 0.25 KH2PO4 0.2 (NH4)2SO4 3 CaCO3 4 ;3、发酵培养基（g/L） 黄豆饼粉 40 淀粉 100 酵母粉 2.5 蛋白胨 15 MgSO4 0.25 CaCO3 4 (NH4)2SO4 3 a-淀粉酶（105U/mL） 0.1mL ;二、培养基灭菌;典型的分批发酵工艺流程图;培养基的预热 培养基先加热到80－90℃，然后再导入蒸汽升温到120－180℃。 目的：1）防止直接导入蒸汽时由于培养基与蒸汽的温度过大而产生大量的冷凝水使培养基稀释 2）防止直接导入蒸汽所造成的泡沫急剧上升而引起的物料外溢。 ;培养基灭菌 从各路通入蒸汽（进气口、排料口、取样口），温度升到120－130℃，保温30min ;分批灭菌的注意事项 各路蒸汽进口要畅通，防止短路逆流；罐内液体翻动要剧烈，以使罐内物料达到均一的灭菌温度。 排气量不宜过大，以节约蒸汽。 灭菌将要结束时，应立即引入无菌空气以保持罐压，然后开夹套或蛇管冷却，以避免罐压迅速下降产生负压而吸入外界空气，或引起发酵罐破坏。 在引入无菌空气前，罐内压力必须低于过滤器压力，否则培养基将倒流入过滤器。;三、孢子制备;接种操作程序见下图。注意：整个实验操作过程都要非常小心，不要碰翻酒精灯，以免烧伤。;（3）火焰边取下两个棉塞，不能放下；烧灼管口一周。;（6）抽出接种环后，烧管口，塞棉塞，接种环灭菌。;2、培养 将接种后的试管 放入恒温箱内， 37℃培养5d。 ;四、种子培养;种子扩大培养流程图 1、2-保藏种子 3-斜面 4-摇瓶 5-茄子瓶 6-固体培养 7、8-种子罐 9-发酵罐;1、任务： 获得大量的活力强的种子，以便在发酵罐的发酵培养过程中尽可能地缩短迟滞期。 ;2、培养类型;②固体培养法 试管 三角瓶 茄子瓶 ; 液体深层培养： 目前几乎所有的好气发酵均采用此法 ;任务三 发酵生产;一、发酵参数控制;小型罐 夹套式换热装置;夹套式换热装置;竖式蛇管换热装置