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(五)菌种的纯化 纯化 概念 措施 是指对分离获得的菌种进行再提纯,成为生产所需要的菌种的方法 菌丝的再提纯 污染物的排除 正常的菌种在固体培养基上,菌丝逐渐向四周呈辐射状生长,边缘整齐一致,菌丝浓密健壮! 五、出菇试验(鉴定) 是菌种投入生产前必须做的结实性鉴定试验 概念 进一步确定菌种,以避免菌种选育不当而造成不可估量的损失 目的 形态特征、生理特性、栽培性状、经济效益等 内容 六、一级菌种转管及培养 转管 过程 取直径3-5mm的母种块移入新斜面中部 转管 目的 扩大繁殖,增加母种数量,以满足生产需要 注意 种块勿太大 原老种块勿再接入 传代次数勿太多 母种 培养 设备 注意 条件 经常检查,及时剔除污染管 控制菌龄(即将长满斜面) 外观检查:菌丝白、整齐、粗壮、有弹性、萌发快则质量好,否则质量差 电热恒温培养箱 25℃左右、干净、干燥、黑暗、通风 七、一级菌种的保藏 (一)保藏目的及原理 使菌种不死亡不生长不污染,不降低或不丧失其优良性,以尽量延长使用时间。 保藏目的 保藏原理 创造不利于菌种生长的一切条件,使其代谢处于休眠状态。 三者之间的关系 菌种类型 制种容器 培养基 菌株来源 用途 要求 一级菌种(试管种、母种) 试管 PDA、PSA 种菇(孢子或菌肉组织) 扩制二级种 菌种保藏 纯度高,质量好,绝对无杂菌 二级菌种 (原种) 菌种瓶 固体培养基 一级菌种 扩制三级菌种 纯度高,质量好,无杂菌 三级菌种(栽培种) 罐头瓶、菌种袋 固体培养基 二级菌种 用于栽培 高纯度,高质量,无杂菌 菌种生产流程 种菇 一级菌种 二级菌种 三级菌种 栽培 菌种为何要经过三级逐步扩大培养 ? 三、菌种生产工艺流程 斜面 一级种培养基制备 高压灭菌 接种 培养 筛选 提纯 原始种 中试后确定一级种 保存 孢子或组织分离 一级种转管、扩大 菌种瓶 二级种培养基制备 高压灭菌 接种 培养 二级菌种 罐头瓶 菌种袋 三级种培养基制备 高压或 常压灭菌 接种 三级菌种 栽培 培养 菌种制作流程 一级菌种(配制培养基→灭菌→接种→培养) ↓ 二级菌种(配制培养基→灭菌→接种→培养 ) ↓ 三级菌种(配制培养基→灭菌→接种→培养) ↓ 栽 培 菌种制作的四个基本环节 配制培养基 灭菌 接种 培养 四、菌种生产场所及设备(现场) (一)菌种场设计基本要求 1、确定制种级别及规模 良种选育对人员素质、设备条件、种质资源的积累、工作的连续性等都有很高的要求。在菌种生产中,由于前一级菌种是后一级菌种的种源,前一级菌种出现质量问题比后一级菌种出现质量问题危害更大。因此对生产和供应较前级菌种厂家的条件和责任的要求更高。 目前,我国农业部已经颁布包含这方面内容的菌种管理行政法规。今后,各菌种厂在制定规划时,应根据本身的技术力量及设备条件,确定适宜的菌种生产级别和规模。 2、制种场地的选择 水、电、路三通,远离禽舍、畜栏、厕所等污染源。 3、菌种场设置要求 菌种场应设原辅料仓库,原料处理场地,洗涤室,配料室,灭菌室,冷却室,接种室,培养室,质检室和菌种储藏室。 4、菌种场的平面布局 应根据微生物易于在空气中传播及其传播的特点规划厂房,布设流水线,以使制种的工艺流程既便于流水作业,节约劳力和投资,又有利于对微生物传播的控制,提高菌种生产的成品率。下面分别介绍简易菌种厂和规范化菌种厂的平面布局。 (二)制种基本设备及常用物品 配制培养基设备:切片机、粉碎机、过筛机、 拌料机、装瓶或装袋机 灭菌设备:高压灭菌锅(手提式、立式、卧 式)、常压灭菌灶 接种设备:净化工作台、接种箱、接种室 培养设备:培养箱(电热恒温、恒温恒湿)、 培养室、培养架、空调 菌种保藏设备:电冰箱、贮藏室(二、三级菌种) 1、制种设备 2、基本器具 玻璃器皿 衡量器具 基础设备 3、基本药品 注意事项! 配置必要的生产设备。 生产能力与生产设备配套 选用质量合格、价格适宜的玻璃器皿、塑料袋、消毒药品等低值易耗品。 复习思考题 1.什么叫培养基?培养基可分为哪几种类型? 2.什么叫菌种?菌种可分为哪几种类型? 3.菌种为什么要经过三级逐步扩大培养? 4.简述菌种生产的基本过程? 第二节 一级菌种制作技术 一、一级菌种的制作流程 二、一级菌种培养基的配制 三、一级菌种培养基的灭菌 四、菌种分离及纯化 五、出菇试验(鉴定) 六、转管及培养 七、菌种保藏
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