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乳铁蛋白的分离纯化;乳铁蛋白的价值;乳铁蛋白LF ,是存在于哺乳动物外分泌液中的一种铁离子结合蛋白结构与转铁蛋 白相似，但铁结合能力是转铁蛋白的 260 倍，LF是由689个氨基酸组成的单一多链分子。 每个分子中有2个金属结合位点，每个位点可结合一个Fe3+和一个HCO3-或CO3。Lf 的铁结合能力与盐的种类和浓度有关，在有较高浓度碳酸盐的场合，其铁结合能力增强，而在有较高浓度柠檬酸盐的情况下，其铁结合能力则减弱。;自 1960年以来人们就试着采用各种方法来制备LF如
离子交换层析色谱,超滤,固定化单克隆抗体,亲和层析等从人乳或牛乳中分离纯化 LF，但色谱法和固定化单克隆抗体法虽能获得较高纯度的 LF但价格昂贵技术要求高,所以并不适用于工业化生产.
超滤法简便费用低,易形成 工业化生产，但 LF 纯度低膜需要经常清洗。;色谱法 ----吸附色谱法 ;亲合色谱法;例如，换Cu2+的1,4一丁二醇二环氧甘油醚亚氨二乙酸琼脂糖,用Cu2+交换后该树脂呈蓝色,
装柱时上面1/2或2/3是铜树脂下半部分未直接交换的Cu2+树脂,洗脱液为用pH值8.0-2.8浓度0.05mol/L的Tris-HAC溶液或浓度0.5mol/L的NaCI溶液作为洗脱液，一般来说,25mL的树脂可以吸附1L干酪乳清的Lf和免疫球蛋白,并且产品的纯度极高。
;固定化单克隆抗体法;超滤法;盐析法 和层析法;试验方 法;盐析：选用硫酸胺沉淀以除去分子量比较小的蛋白，将乳清用30%的饱和硫酸铵沉淀 30min后，4℃条件4000r/min离40min;
将得到的上清液再用50%的饱和硫酸铵沉30min后,4℃条件下4000r/min离心40min，除去免疫球蛋白沉淀，将得到的上清液用
85%的饱和硫酸铵沉淀30min。
此时需在PH8.5的情况下，4℃4000r/min,离心40min。
此时收集沉淀，并用蒸馏水溶解。;凝胶层析：
为了获得较高纯度的LF，选用
sephadex-G-100 对LF进行分离和纯化。
将透析后的乳清1mL加入平衡过的凝胶层析柱，在20℃条件下以0.2mL/min的流速 进行洗脱，洗脱液选用pH7.4的PBs（Nacl含量 8g/1000mL)，待出现峰值后收集洗脱液，每管收集lmL。;LF 的鉴 定;结果与分析;分光光度法
采用分光光度法测
定LF浓度,首先利
用纯度为92%的LF
溶液在400-650nm
下扫描，发现在475nm波长产生特征吸 收峰(见图3)于475nm测定其吸光度,作出浓度C与吸光度A之间关系的线性回归方程,如图四,得方程为:c=827.49A+5.7315(R2=0.9954)。
;图4显示A475值未能达到一般分光光度法的线性范围(0.1-0.7)。这是由于A475与LF铁饱和度有关100%铁饱和度的LF的A475仅为0.57。LF的铁饱和度越低,A4A475就越低本文制备的LFA475
为0.116,则质
量浓度为
101.73g/ml.;鉴于分光光度法快速，简便,对仪器设备的要求不高。
虽然准确性不是很高，但可以快速地测定LF的量适用于工厂中分离纯化过程中的在线检测。通过以上结果可见,采用3次盐析和1次凝胶层析提取LF的效果好于2 次盐析和2次凝胶层析，本次试验所获得的LF的含量 较高，能够减少再次凝胶层析过程中LF的损失，并且 所获得的LF的纯度也较高，可应用于医药行业
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