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高效毛细管电泳法简介 第一节 概述 HPCE简介 HPCE的基本原理 HPCE的分离类型及应用 高效毛细管电泳法High Performance Capillary Electrophoresis HPCE；CE 电泳法是早在30年代提出的。 电泳技术用于医学、生物化学分离分析蛋白质、核苷酸及其他生物大分子，A.Tiselins于1948获诺贝尔化学奖。 缺点是效率较低、操作繁琐。 为了提高分离效率需增加电场强度，但因焦尔热的产生(Joule heating)限制了高电压的应用。 1967年，Hjerten最先提出在30mm内径的毛细管内进行区带电泳。降低了部分焦耳热，而未根本解决问题。 1981年，Jorgenson和Lukacs，提出用小于 80?m的毛细管进行区带电泳。解决了焦耳热与轴向（纵向）扩散问题，使电泳技术取得突破性进展。同年，他们用75?m内径，100cm长的毛细管，30kV电压，分离氨基酸和多肽。获得40 万理论塔板数的高柱效，并实现了阴、阳离子的同时分离。此项工作，被认为是HPCE技术发展史上的里程碑。1984年，Terabe 提出胶束电动毛细管色谱法（MECC），弥补了用CZE分离中性分子效果不佳的弱点。 由于该法不仅能分离分析有机与无机阴、阳离子，中性分子及大分子，而且具有柱效高、分离速度快、样品用量少、应用范围广等特点，因此已成为当前最重要的分离分析方法。 因该法还特别适用于氨基酸、多肽、蛋白质和核酸等生物分子的分析，已成为生命科学研究、刑侦不可缺少的手段。 在中药研究上，虽然还刚刚开始，但已显现出强大的优势。其分辨率可比HPLC高1?2个数量级，用HPCE建立鉴定中药材及中成药的指纹谱库，是可行的方法。中药与复方药物多组分同时定量，已成为可能。 在对映体的分离分析上，HPCE是既便宜，分离效果又好的方法。 特点对比 柱效:105?106（HPLC：104）； 峰容量15?20/min（HPLC：5/min） 进 进样量：10ng?10-1?g（HPLC10?g） 一、基本原理 高效毛细管电泳法(HPCE)技术和液相色谱技术主要的区别在于其分离原理不是基于组分在流动相和固定相间的分配系数与保留时间不同而分离。HPCE是在电场作用下离子的电荷与大小不同、迁移的速度不同分离。毛细管电色谱，则具有电泳及色谱二种分离行为。 （一）流路 H HPCE仪主要由高压电源、毛细管、背景电解质贮液槽、检测器及工作站等部分组成。基本结构如图21-22所示。一根长约50～100cm，内径25～100μm的熔融毛细管柱，一端由进样装置吸入样品，一端经过检测器。毛细管两端插入电解质贮液槽中,用高压电源外加约20kV～30kV的稳定电压。 HPCE柱效高的原因 1.无涡流扩散项与传质阻抗项 柱效用Van Deemter方程式H=A+B/u+Cu讨论。 在高效毛细管区带电泳中，使用空心毛细管柱，无涡流扩散项（A=0）。内壁也不涂渍固定液，消除了流动相平衡所需要的时间，使传质阻抗项（Cu）趋于零。因此，使Van Deemter变为： H = B/u 式中：H为板高，B/u为纵向扩散项。因A=0，C/u=0，而大大提高了柱效。在HPLC中H=A+Cu。因此，HPCE比HPLC的柱效高的多。每米毛细管柱的理论塔板数可达105（片）以上。 2.流型不同 HPCE HPLC (二) 电泳和电泳淌度 通常物理学中用淌度(mobility)量度电场中离子的迁移速度。电泳是在电场作用下带电粒子在缓冲溶液中的定向移动。带q电荷的离子置于场强为E的电场中所受力为qE牛，而溶液中离子所受的摩擦力为fuep，这里uep 是离子的电泳速度,下标ep表示电泳(electrophoresis),f是摩擦系数。因为在电场中: uep =qE/f  定义电泳淌度μep ,等于电泳速度uep和场强E的比值，即： μep= uep/E 电泳淌度μep即单位场强下,离子的电泳速度. 量纲为m2/(V．s)。 电渗（Electroosmotic)是一种液体相对于带电的管壁移动的现象。在熔融毛细管内壁的Si-OH解离为硅氧基(Si-O-)阴离子与H+。H+与H2O，形成H3O+。由于硅氧