药物发现中ADMET方法.ppt

I相代谢关键酶---细胞色素P450 细胞色素P450 (CYP)家族 CYP1A2, CYP2A6, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6, CYP2E1 and CYP3A4 NADPH依赖的氧化酶 CYP3A4 是药物的主要代谢酶 ~50%已知药物通过CYP3A4代谢 II 相代谢关键酶 UDP-依赖葡糖醛酸基转移酶(UGT) 苯酚磺基转移酶 (PST) 雌激素磺基转移酶 (EST) 谷胱甘肽-S-转移酶 (GST) 一些细胞抗氧化酶 三种肝细胞制品及代谢分析 全肝细胞代谢分析 肝微粒体代谢分析 S-9 肝匀浆液 代谢分析 药物肝脏代谢稳定性分析过程 药物肝脏代谢稳定性分析结果 % 原药消失率 = （1 - ）×100% 原始药物浓度c0 代谢反应后药物浓度ct 全肝细胞(?????) 肝微粒体(???) 仅包括I相代谢酶 易于保存 分析操作容易、费用低 包括所有代谢酶和转运蛋白 费用高，细胞保存不易 S9肝匀浆液(????) 包括主要I、II相代谢酶 分析操作容易、费用低 匀浆液保存不稳定 药物毒性 药物毒性评价的基本方式---细胞活力分析 细胞生长 细胞能荷 线粒体活性---MTT分析 细胞氧化还原状态---谷胱甘肽含量分析 细胞特征性功能 蛋白质合成 核酸合成 吞噬、排除外来分子能力等 细胞膜完整性---胞浆酶活性分析 MTT细胞活力分析 原理： 线粒体酶将探针分子MTT*还原成为一种蓝色脂溶性染料formazan（吸收波长550nm） 线粒体活性越高，转化能力越强 实验方法：将MTT加入到细胞培养液中，反应一段时间后，用有机溶剂溶解产生的formazan，然后用酶标仪测定 550 nm吸光度. 特点：方法简单可靠，费用低，高通量 * MTT：3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide 药物毒性分析过程 LD50，IC50，EC50 线粒体毒性模型 Early Prediction of Hepatotoxicity Through Technological Development World Pharmaceutical Congress, June, 2010 ROS ATP synthesis Cyt c Djm 关于药物毒性分析数据 毒性分析的结果是LD50或IC50或EC50，表示药物导致细胞活力降低一半时需要的浓度 LD50或IC50或EC50越小，药物毒性越大 每种细胞活力分析方法都具有片面性，多种方法测定一种化合物毒性是有益的 进行药物毒性分析时，推荐使用人源的原代完整肝细胞，数据可靠性高 当使用永生化细胞和肿瘤细胞时，由于这些细胞(特别是肿瘤细胞)的药物代谢能力较差，因此得到的细胞毒性数据是一种“本征毒性(intrinsic toxicity)”。将实验数据推广应用时，注意补偿不同组织细胞的代谢能力。 药物毒性和药物-药物相互作用 排出抑制型相互作用： 药物1抑制药物2的排出，导致药物2浓度过高产生毒性 代谢抑制型相互作用 药物1抑制药物2的代谢，导致药物2浓度过高产生毒性 代谢诱导型相互作用 药物2诱导药物2的代谢，导致 药物2被过度活化，使代谢毒性产物浓度增加 药物2因代谢失效 小结：ADMET研究诸方面 ADME：生物利用率 药物间 相互作用 药物分布 血浆蛋白 结合力 血脑屏障 渗透能力 药物清除 药物吸收 消化道稳定性 肾排出 肝脏清除 代谢稳定性 胆汁排出 溶解性 渗透能力 代谢诱导 代谢抑制 药物毒性T 细胞活力 抑制分析 排出抑制 扩散能力 药物外流载体 药物吸收载体 代谢酶亚型 一个例子--- 食物中的黄酮类化合物 食物成分黄酮类化合物及其作用 雌激素样作用 弱类雌激素活性 防治一些和激素水平下降有关的疾病，如衰老、更年期综合症、骨质疏松、血脂升高等 抗雌激素活性 预防激素依赖型肿瘤及心血管疾病的发生。 抗氧化作用 抑制肿瘤作用 降低胆固醇、调节血脂，预防心血管疾病和老年性痴呆症 黄酮通式 异黄酮通式 黄酮苷和黄酮苷元 大豆异黄酮苷元 大豆异黄酮葡萄糖甙 水解 b-葡萄糖苷酶（肠道微生物） 肠道乳糖-根皮素水解酶 O 黄酮类化合物的吸收代谢机制 黄酮苷 黄酮苷元 水解 CYPs 代谢分解 MRP2 BCRP UGT SulT 紧密连接 MRP3 酶水解 酶水解 肝、肾排出 黄酮类化合物吸收的关键因素 黄酮苷的水解---利于吸收因素 肠道正常细菌