基于消基还原酶的荧光氧探针-副本.docVIP

基于硝基还原酶的荧光氧探针 摘要：硝基还原酶在细胞低氧条件下大量存在，利用其对硝基化合物的催化还原性能，不仅可以用于药物的激活和硝基芳香族化合物的生物降解，同时也可用来设计含硝基的荧光探针，用于检测实体瘤细胞的缺氧状况，并对低氧环境下的肿瘤细胞进行生物成像，这对临床治疗、增强机体代偿适应能力都有重要意义。 关键词：硝基还原酶；荧光；氧探针 Fluorescent Oxygen Sensor Based on Nitro Reductase Abstract: Nitrate reductase is found in the cells under the condition of low oxygen concentration with large Number. With the ability of catalytic reduction of nitro compounds, it not only can be used for drug activation and biodegradation of nitro aromatic compounds, but also can be used to design fluorescent probe for detecting the anoxic condition of solid tumor cells, and imaging the tumor cells living hypoxia environment, which are quite important for clinical treatment and enhancing the body compensatory ability of accustomization. Key words: nitrate reductase; fluorescent ; oxygen sensor 1 引言 氧气是生命体的必需元素，人可以一个月不吃东西，两个礼拜不喝水，但是不能10分钟不呼吸氧气。生命体中，氧气的含量至关重要：富氧会产生大量的自由基，使机体组织损害，器官退化，免疫力下降；缺氧一开始会导致头晕眼花、然后呼吸急促、丧失判断力，严重一些就会丧失智力、晕厥，最严重可致死。同时，低氧是实体肿瘤微环境的典型特征之一，它在实体肿瘤中普遍存在，被认为是导致肿瘤进展及预后差的独立因素。低氧诱导生物学行为的改变加速了肿瘤恶性转变，如抑制细胞增殖、增强耐药基因表达、选择性抗凋亡、促进肿瘤侵袭转移、下调DNA修复基因表达及增加基因的不稳定性。众多研究表明低氧具有调控癌细胞分化能力，它通过促进肿瘤干细胞生成及表观遗传修饰，从而增强肿瘤恶性潜能。因此，通过检测细胞中含氧的浓度，利用肿瘤细胞的低氧性，我们可以对癌细胞特异性的靶向诊断和治疗。由此，研究人员设计发展了一系列检测细胞中氧含量的方法。 氧浓度的检测方法有传统检测法和光学氧探针法[1]。传统检测法中，Winkler滴定精密，但不能持续测定；Clark电极对氧有损耗，适用于室温、小体积检测；光学探测需要大型昂贵的仪器，同时水、二氧化碳分子等对检测都有干扰。而相较之下，光学氧探针检测过程可实现无氧损耗的可逆过程，检测结果精密、准确，对细胞无创伤，在生物体中可以实现远程传感并组织区域成像。近些年，光学氧探针得到了迅速发展。 在光学氧探针体系中，发展了通过检测低氧环境下的硝基还原酶的含量来检测细胞中的氧含量的硝基还原酶荧光氧探针。 生物体中存在大量的酶，其中有一类硝基还原酶，它可以将硝基化合物催化还原为羟胺或氨基化合物。硝基还原酶可以激活硝基类药物，使其产生细胞毒性。同时，在细胞低氧条件下，硝基还原酶大量产生，利用硝基还原酶催化还原硝基化合物的这一特性，可以设计含硝基的荧光探针。根据不同的荧光响应机理，可以实现Turn-on、Turn-off和比率计型荧光探针，用于检测实体瘤细胞的低氧性，并对低氧环境下的肿瘤细胞进行生物成像。这一检测方法具有简便、高灵敏度和高时空分辨能力等特点，在临床治疗、增强机体代偿适应能力等方面具有重要意义。本文将简要介绍利用硝基还原酶来设计荧光探针检测细胞低氧性的基本发展概况。 2 硝基还原酶的结构及其还原机制 硝基还原酶(nitroreductase, NTR)[2]是一类依赖于黄素单核苷酸（flavin mononucleotide, FMN）或黄素腺嘌呤二核苷酸（flavin adenine dinucleotide, FAD）的细胞质酶，它可以利用NAD(P)H实现硝基芳香族化合物和硝基杂环衍生物的还原代谢。硝基还原酶通常以不对称同源二聚体的形式存在，其二聚体交界面处结合有两个FMN辅助因子，其结构如图1。 图1 图1 大肠杆菌硝基还原酶