工业微生物育种学10课件.pptVIP

第四节 营养缺陷型菌株的筛选;原养型菌株：即野生型菌株，可以合成生长所需的各种营养物质。 营养缺陷型：指营养缺陷型菌株经过诱变或自然突变失去合成某种营养成分的能力，只有在基本培养基中补充所缺乏的营养因子才能生长。;培养基类型;一、营养缺陷型菌株的分离和筛选;营养缺陷型的诱发;抗生素法原理;抗生素法处理方法;②收集菌体离心洗涤，然后转到基本培养基中进行饥饿培养4~6小时，以消耗在完全培养基中摄取而储存在体内的氮素营养，使其停止生长，否则也会被青霉素杀死。 ;③再转移到含无机氮的基本培养基中培养3~4小时，使野生型细胞刚刚进入对数期，加入一定浓度的青霉素，大量野生型细胞瓦解、死亡，释放出细胞内的许多物质，其中有的被缺陷型作为营养利用而得以继续生长，最终也被青霉素破坏，造成缺陷型筛选率大为下降。为防止这种现象的发生，可以在基本培养基中加入20%蔗糖，以提高渗透压，使死亡的野生行细胞处于高渗透液的包围中，阻止原生质体破裂。;④在基本培养基和完全培养基上涂平板，比较两种培养基上菌落的差数。在基本培养基上不长的就是营养缺陷型菌株。;菌丝过滤法原理;菌丝过滤法处理方法;高温杀菌法原理;高温杀菌法处理方法;二、营养缺陷型的检出;（一）点植对照检出法;（二）影印法;丝绒印模;采用影印法进行霉菌缺陷型检出时，要注意两点： 第一，防止菌落扩散和蔓延，可在培养基中加入0.5%左右的脱氧胆酸钠，或在基本培养基中用山梨糖作为碳源，再加入适量蔗糖使菌落长得小而密； 第二，克服孢子扩散带来的不纯现象。用薄纸覆盖代替影印。;（三）夹层法;（四）限量补给法;三、营养缺陷型的鉴别;营养缺陷型的测定方法;;营养缺陷型鉴定步骤;1 缺陷型菌株所需类别的测定;营养缺陷型类别的测定;2 缺陷型所需生长因子的测定;;氨基酸组合表;维生素组合表;单一营养缺陷型的检出;生长组合和氨基酸缺陷对应表;氨基酸营养缺陷型测定;生长组合和氨基酸缺陷对应表;氨基酸组合表;氨基酸营养缺陷型测定;生长组合和氨基酸缺陷对应表;氨基酸组合表;氨基酸营养缺陷型测定;生长组合和氨基酸缺陷对应表;氨基酸组合表;维生素组合表;生长组合和生长因子对应表;维生素营养缺陷型测定; 这里测定的都是单缺菌株，如果要测定双缺以上的菌株，可以采用每一培养皿中都缺一种生长因子的做法。 例如：测定维生素缺陷株 把15种维生素混合制备15套平板，每个平板都少加一种维生素，将缺陷菌株接种到上面，如果在缺a和b的平板上都不长，说明该菌株是a和b的双缺陷型。;复证;思考题