2.3分解纤维素的微生物的分离优质课件.pptx

课题3分解纤维素的微生物的分离1.能简述纤维素酶的种类及作用。2.能从土壤中分离出分解纤维素的微生物，了解这类微生物的应用。3.能掌握从土壤中分离某种特定微生物的操作技术。纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质，植物每年产生的纤维素超过70亿吨；分布在植物的根、茎、叶中。为什么地球上每年产生这么多的纤维素，我们还没有被纤维素淹没？在枯树或草炭土中有许多能利用和分解纤维素来作为能源的微生物，今天我们就来观察土壤中能水解纤维素的微生物。（一）纤维素与纤维素酶 纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质，是天然有机高分子化合物：自然界中纤维素含量最高的天然产物是棉花，含量达92％～95％，亚麻达80％，此外木材、作物秸秆也富含纤维素。纤维素可用于纺织工业，可造纸 许多商品纤维素都是由天然纤维素制得：如水溶性的羧甲基纤维素钠（CMC---Na）；不溶于水的微晶纤维素等食品添加剂。 纤维素酶不是单一酶，是复合酶，包括C1酶、CX酶、葡萄糖苷酶。C1酶：(外切酶) 从糖链的末端开始切掉两个葡萄糖分子，产生纤维二糖。CX酶：(内切酶) 作用于糖链的内部使之断裂成糖链片段葡萄糖苷酶：将纤维二糖分解为葡萄糖C1酶Cx酶葡萄糖苷酶纤维二糖纤维素葡萄糖思考：A、人能不能对纤维素消化吸收？为什么？不能，因为人体不能合成纤维素酶。人以淀粉为主要的能量来源B、食物中的纤维素有什么作用？ 食物中的膳食纤维可刺激胃肠蠕动和分泌消化液，有助于食物的消化和排泄。C、反刍动物能利用纤维素吗？为什么？ 能，在反刍动物的瘤胃中生活着大量可以分解纤维素的微生物，能产生大量的纤维素酶甲 乙纤维素酶分解纤维素的实验①取二支20mL的试管②各加入一张滤纸条滤纸崩溃法③各加入pH4.8，物质量为 0.1mol/L的醋酸－醋酸钠缓冲液11ml和10ml④在乙试管中加入1mL纤维素酶⑤两支试管固定在锥形瓶中，放在140r/min的摇床上振荡1h⑥结果：乙试管的滤纸条消失讨论：乙试管的滤纸条为什么会消失？甲试管的作用是什么？纤维素纤维素被分解红色复合物无法形成红色复合物加入刚果红出现以纤维素分解菌为中心的透明圈通过产生的透明圈来筛选纤维素分解菌二、纤维素分解菌的筛选1、筛选方法：刚果红染色法2、筛选原理： 刚果红（CR）是一种染料，它可以与象纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应3、筛选过程：图2-13四种纤维素分解菌在刚果红培养基上形成的透明圈4、纤维素分解菌的选择培养基和鉴别培养基①纤维素分解菌的选择培养基 酵母膏的作用：提供蛋白质多肽，氨基酸，核酸，b族维生素，脂肪等氮源，微量元素营养物质 水解酪素的作用：提供合成蛋白质所需的氨基酸，为氮源 培养基作用：增菌，富集培养思考：A、物理性质上看选择培养基的类型及原因 液体培养基，因培养基中无凝固剂，利用液体培养基培养以增加纤维素分解菌的浓度B、培养基具有选择作用的原因 能够产生纤维素酶的微生物才能分解纤维素作为碳源和能源，并大量繁殖；不能分解纤维素的微生物由于缺乏碳源受到抑制而不能正常生长繁殖，因此培养基具有选择作用C、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用？答：用牛肉膏蛋白胨培养基与其对照D、为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？ 在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速的繁殖。而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到浓缩的作用。②纤维素分解菌的鉴别培养基 羧甲基纤维素钠(CMC-Na),是天然纤维素经化学改性后得到的纤维素衍生物 土豆汁：含大量纤维素，便于纤维素分解菌的繁殖以形成菌落；此外，土豆比起经提纯的纤维素粉成本要低得多，而效果虽然存在干扰，但是也足够清晰可辨。 培养基作用：鉴定富集培养 纤维素分解菌的选择培养中，碳源为纤维素。能够生长纤维素酶、水解纤维素的细菌大量增殖，而不能利用纤维素为碳源的微生物的生长受抑制。经过一次培养后，再取少量的培养液转移到新鲜的培养液中重新培养，该过程经数次培养后能利用纤维素为碳源的微生物比例在培养液中将大大提高，将培养液涂布在以纤维素为唯一碳源的鉴别培养基的琼脂板上，得到的微生物菌落大部分是纤维素分解菌。练一练：1.下列关于纤维素酶的说法，错误的是（ ）A. 纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种B. 纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖C. 纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁D. 葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖2.利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是（ ）A. 刚果红能与纤维素形成红色复合物 B. 刚果红能与纤维二糖形成红色复合物 C. 刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物D. 若培养基上产生了透明圈，则说明已筛选出了纤维素分解菌土壤取样选择培养梯度稀释挑选产生透明圈的菌落