jjw-细胞周期-2014.6课件.ppt

细胞周期;Chen（Chen, 2009）提出联合使用黄芩素和水飞蓟素，对肝癌HepG2细胞显示良好的杀伤作用，对正常肝细胞（Chang liver）活性没有影响，两种药物联合应用增加了G0/G1期细胞的百分率，减少了S期细胞的百分率，上调了Rb、p53、Cip1/p21和Kip1/p27蛋白，下调了Cyclin D1、Cyclin E、CDK4和phospho-Rb。 Varghese（Varghese, 2005）采用肝癌HepG2和 Hep3B细胞研究水飞蓟宾的抗肿瘤作用，发现水飞蓟宾强烈抑制HepG2和Hep3B细胞增殖，且对Hep3B细胞的增殖抑制效果更强。对于HepG2细胞，水飞蓟宾导致G1期阻滞；对于Hep3B 细胞，导致G1 和G2-M 阻滞。对于这2种细胞，水飞蓟宾诱导Kip1/p27表达，减少cyclin D1、cyclin D3、cyclin E、CDK2和CDK4表达水平。 Varghese L, Agarwal C, yagi A, Singh RP, Agarwal R. Silibinin efficacy against human hepatocellular carcinoma. Clin Cancer Res, 2005,23(11):8441-8448. ;PI单染流式细胞仪检测细胞周期百分比（n=3）; G1期到S期的转折;G2/M转折和有丝分裂的调控;细胞周期;细胞周期与DNA合成;G1→S→G2→M→G1周期性运转， 在间期细胞体积增大(生长)， M 期细胞 先核分裂， 接着胞质分裂， ;G1期：DNA复制的准备期;G2期: 细胞分裂的准备期;M期：进行细胞分裂 ;M期-中期 要点: 纺缍体及赤道板形成 特点: 纺缍体：已形成，稳定 染色体：高度浓缩，形成中期板(赤道板) 细胞形状：圆形、易脱落 ;M期后期 要点: 后期开始染色单体分离，分别移动到相反的纺锤体极。 细胞形状：略变长。 ;M期末期 要点:细胞质分裂，形成2个子细胞 特点 胞质中重新出现正常结构，纺缍体消失。 新的核膜形成，染色体解螺旋化形成染色质。 胞质分裂cytokinesis：形成特殊临时性结构--收缩环， 细胞膜内陷， 生成2个子细胞 。每个子细胞含有一套完整的染色体，细胞则完成一个周期，进入下一个间期。  ;M期细胞的有丝分裂;典型的真核生物细胞周期都有2个特征：生长和细胞分裂。 ;;0h 4h;第一部分： 细胞周期概况： 间期：G0，G1，S，G2 分裂期：M 2. 实验发现一些蛋白和激酶调控细胞周期 MPF的发现： PCC：prematurely condensed chromosome 染色体超前凝集 MFP：mitosis-promoting factors 细胞促分裂因子 APC：anaphage promoting complex 细胞分裂后期促进复合物;MPF的发现及其作用:;G1期PCC为单线状，因DNA未复制;;人M期细胞与袋鼠的G1、S、G2期细胞融合诱导PCC：;MPF,即卵细胞 促成熟因子(maturation-promoting factor), 或促细胞分裂因子(mitosis-promoting factor), 背景二：1971年,Masui和Markert用非洲爪蟾做实验，明确提出了MPF这一概念。 非洲爪蟾卵母细胞在其卵巢里发育，它们复制DNA，然后在G2期停滞。受到雄性刺激后，卵巢细胞分泌孕酮，刺激G2期细胞进行减数分裂，停滞在第二次减数分裂中期，称为卵子（M期）。 实验（1）取一个G2期的卵母细胞，孕酮处理，诱导它成熟为卵细胞（M期）。 （2）利用一微针头将卵细胞（M期）的胞浆5%转移到另一个处于G2期的卵母细胞，促进这个卵母细胞(G2期)发育成熟。;因此，在成熟卵细胞的细胞质中必然有一种物质，可以诱导卵母细胞成熟，称之为促成熟因子，MPF。MPF: 卵细胞促成熟因子(maturation-promoting factor), ;分离纯化出MPF：;Ⅱ p34cdc2激酶的发现及其与MPF的关系：;P.Nurse在裂殖酵母中发现的cdc2基因就是第一个被分离出来的cdc基因。其表达产物是一种相对分子量为34×103的蛋白，被称为p34cdc2。 进一步研究发现，p34