《甲胎蛋白基因的转录水平检测》课件.pptVIP

甲胎蛋白基因转录水平的检测 组员：张晋华 刘淼 黄莉玲 焦阳 实验目的 实验方法及原理 技术路线 结果分析 应用 通过提取肝癌病人的癌细胞组织和癌旁组织，根据mRNA丰度的测定方法，从转录水平对AFP（甲胎蛋白）基因的表达进行检测 肝癌病人术中切取少量新鲜的肝癌组织及癌旁1cm的肝组织，迅速至-80℃冻存。 取材 目的 通过细胞RNA的提取技术，将定量的组织中的RNA提取出来，然后使用Northern blot技术，通过琼脂糖凝胶电泳、原位转移、放射自显影，测定AFP mRNA的丰度。 Northern blot: （诺瑟杂交）是一种通过检测RNA的表达水平来检测基因表达的方法。首先通过电泳的方法将不同的RNA分子依据其分子量大小加以区分，然后通过与特定基因互补配对的探针杂交来检测目的片段 原理 细胞RNA的提取 RNA的分离纯化 4.RNA转移和固定 琼脂糖凝胶电泳分离RNA 探针分子杂交 放射自显影 TRIzol是一种新型总RNA抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。 TRIzol法 匀浆处理:将组织在液氮中磨碎 ,100mg组织中加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。 室温（15-30℃）放置5分钟。 加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温