原生质体融合构建耐高温酵母菌株!-食品与发酵工业.PDF

第 卷 第 期 孙君社等：原生质体融合构建耐高温酵母菌株 *# + 原生质体融合构建耐高温酵母菌株! 孙君社 李 雪 李军席 （中国农业大学食品学院，北京， ） !#$ 摘 要 通过原生质体融合选育耐高温的酵母，以解决在纤维素类物质同步发酵过程中酵母 发酵温度同纤维素酶酶解温度不一致的问题。利用电场诱导原生质体融合技术对产酒率高 的菌株 和产酒率低但耐高温的菌株 进行融合。经过融合条件的选择，分别对 亲 %! ’( )$ * 株进行遗传标记， 蜗牛酶处理原生质体，在脉冲强度为 、宽度 、次数为 次时 $ )+ , !! -. ! % * ! 进行融合，得到数株融合子。鉴定得知，融合子* 是所需要的融合子，其在固态发酵/+0 时产 酒精能力达到体积分数1 )*#, 。 关键词 酵母菌，原生质体，电融合，高温酒精发酵 在纤维素类物质同步糖化发酵（ ）过 同酵母最适温度不同的问题。 %%6 程中，制约反应效率的! 个重要因素就是纤 ! 材料与方法 维素酶的最适温度同酵母发酵的最适温度的 不一致，纤维素酶的最适温度为/+ 7 + 0 左 ! ! 菌 株 右，而酵母发酵的控制温度一般在 $ 0 左 （）葡萄酿酒酵母 ：由中国微生物 ! ’( )$ 右，选用耐高温酵母菌株是解决纤维素同步 菌种中心提供，该酵母耐高温能力强，可在 ［］ 发酵中这 ! * 个温度不协调的有效方法 。 /+0条件下很好的生长，但在此温度发酵时， 长期以来，高温菌株的选育主要集中在 产酒精能力较差。 ［，］ ［］ 自然界筛选* $ / 和高温驯化 。利用分子生 （） 酵母：由山东大学微生物系购 * %! ［］ + 得，在 条件下生长很好，产酒精能力较 物技术手段改良酵母等亦有报道 。原生质 $ 0 体融合是以 亲株的细胞膜的融合为起点， 强。 * 经细胞质的完全融合，直至基因组的交换重 !# 培养基 组，产生众多的重组子，从中筛选出耐高温型 （）麦芽汁固体培养基，灭菌后加入溴化 ! ［］ ［］ ［］ 4 1 # 乙锭，质量浓度为