2017年全国质检系统科研成果评定申报-上海交大科研院.PDF

附件4 2017年度全国质检系统科研成果评定申报公示表 成果名称 食源性致病微生物的快速高通量检测技术研究 推荐单位 浙江出 境检验检疫局 成果来源 国家质检总局科技计划项 目 “食源性病原微生物的高通量快速检测方法研 （具体计 划、基金的 究” （2007IK145 ） 名称和编 国家质检总局科技计划项 目 “活菌内标的研制及其在单核细胞增生李斯特菌 号） PCR 检测中的应用” （2011IK147 ） 近年来，全球食品安全恶性事件频发，食源性疾病发生率居高不下，目前， 对食源性疾病的预防与控制已经引起了各国广泛关注，食源性致病菌检测技术 是食源性疾病预防与控制的关健技术环节。本项 目由上述两个课题组成，均由 同一科研团队完成，通过团队的共同努力，从 2007 年到 2017 年的 10 年间， 用基因芯片技术、活菌内标 PCR 和环介导等温扩增技术 （LAMP ）多技术手 段构建了全方位立体微生物检测体系，满足了实际工作中高通量初筛、快速检 测及血清分型的需求。经反复验证应用，证明该检测平台通过多种技术手段， 建立了快速、灵敏、准确、高通量的食源性致病菌检测技术体系，从而为进出 口检验检疫、食源性致病菌预警系统的建立提供方法学依据。主要研究成果如 下： 1、采用可见光基因芯片技术，对 12 种重要食源性致病菌 （志贺氏菌、耶 尔森氏菌、沙门氏菌、腊样芽孢杆菌、空肠弯曲菌、金黄色葡萄球菌、霍乱弧 成果简介 菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特菌、布鲁氏菌、变形杆菌、肠出血性 大肠杆菌 O 157 ：H7 ）进行高通量平行检测。 2 、采用自主发掘的内控标准序列，构建重组质粒，再通过同源重组将该 内标序列整合到单核细胞增生李斯特菌的染色体上，构建活菌内控标准物质， 以全程指示检测过程 （从取样到 PCR 扩增全过程）中出现的假阴性问题。建立 基于活菌内控标准物质的单核细胞增生李斯特菌荧光定量 PCR 检测技术，并开 发相关检测产品。 3、采用利用生物信息学和比较基因组学，筛选到肠杆菌科致病菌 （包括志 贺氏菌、耶尔森氏菌、沙门氏菌、变形杆菌、肠杆菌属、克雷伯氏菌属等肠道致 病微生物）的共有基因序列，经 PCR 方法验证，确定了后续用于环介导等温扩 增技术 （LAMP ）的检测靶点，根据靶点设计 3 对 LAMP 引物，成功建立了肠杆 菌科 LAMP 快速检测体系。 4 、基于比较基因组学的生物信息学方法，针对鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门 氏菌等主要食源性沙门氏菌血清型，发掘不同血清型的特异基因片段作为分子靶 点，通过特异性强的 PCR 检测方法，建立能够用于沙门氏菌快速血清分型的分 子方法。 本项 目获得国家发明专利授权 5 项，2 项国家实用新型专利，申请国家发 明专利 2 项；制定国家标准 1 项、检验检疫行业标准 2 项；发表科技论文 14 篇，其中 SCI 论文 5 篇。“活菌内标的研制及其在单核细胞增生李斯特菌 PCR 检测中的应用”的研究成果达到国际先进水平。 创新点 1：建立了食源性致病菌 高通量快速检测方法研究 （1）根据细菌 16S rDNA 和 23S rDNA 基因的保守区域设计通用引物，利 用两重 PCR 简化实验操作，节约检测时间，并能同时检测 12 种食源性致病 菌 （（志贺氏菌、耶尔森氏菌、沙门氏菌、腊样芽孢杆菌、空肠弯曲菌、金黄 色葡萄球菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特菌、布鲁氏菌、 变形杆菌、肠出血性大肠杆菌 O 157 ：H7 ），实现致病菌 快速高通量检测 目 标。采用可见光基因芯片技术，可通过肉眼直接观察结果，无需昂贵分析仪 器，且试剂费用低廉，非常利于在基层机构推广使用。