分子生物学试验讲稿.DOC

分子生物学实验课程讲稿 第 PAGE 1 页 ，共 NUMPAGES 27 页 分子生物学实验讲稿 实验一：分子生物学各种仪器的使用和药品配制的一般方法 实验目的： 1、通过实验掌握分子生物学的基本技能和仪器的使用方法。 2、学习分子生物学实验中药品的配制及其规范 实验内容： 1 离心机的使用规范。 2超低温冰箱的适用范围和用途。 3移液枪、高速离心机、电泳仪、纯水仪的使用简介等。 4分子生物学药品及试剂种类和的选用。 实验设备及材料： （1）实验设备: 纯水仪、凝胶呈像系统、PCR仪器、制冰机、高速冷冻离心机、超低温冰箱、紫外分光光度仪、控温摇床、超净工作台等仪器、微量依液枪。 （2）相关药品和试剂： = 1 \* GB3 ①分子生物学相关符号：A260、bp、cccDNA、E.coli、kb、MCS、ocDNA、Ori、OD、PAGE、PCR、RNase、rpm、ss、Taq DNA polimerase、SDS。 = 2 \* GB3 ②分子生物学相关药品和试剂： Amp、BPB、CIAA、dNTP、DEPC、EB、EDTA、IAA、PBS、PCI、PEG、SDS、TAE、TBE、TE、Tris-HCL 实验方法步骤及注意事项: （1）药品和试剂的特性和配制： = 1 \* GB3 ①向学生强调仪器的使用和药品配制的重要性 = 2 \* GB3 ②介绍一些重要符号和名称（要求学生上网查阅理解其正确的概念） = 3 \* GB3 ③使学生掌握原液法配制试剂的优点 = 4 \* GB3 ④分组后让每组选择1-2种分子生物学的重要试剂进行配制 = 5 \* GB3 ⑤上网查阅试剂的配制方法及试剂配制的优化以及该试剂的用途和实验原理 = 6 \* GB3 ⑥正式实验课时正确配制试剂 = 7 \* GB3 ⑦在后续实验中加以证实试剂配制的优劣。 （2）仪器的使用和用途： = 1 \* GB3 ①在实验课预实验前老师带各班同学参观分子实验室现有的重要仪器 = 2 \* GB3 ②对重要的仪器功能向学生演示。 = 3 \* GB3 ③让学生记下相关仪器的型号。 = 4 \* GB3 ④学生上网查阅该型号仪器的使用参数和性能、仪器的用途等 = 5 \* GB3 ⑤了解和熟悉仪器根据下序实验的原理让学生自行设计和选用仪器。 试剂配制： 1、1M Tris-Cl (ppH8.0) 500ml原液的配制 Tris—三羟基氨基甲烷（hydroxymethy aminomethane） 分子量：121.41g，分子式：C4H11NO3 称取1mol/l×500 ml×121.41g=60.57gTris，加入200 ml双蒸水，用盐酸调节pH到8.0，补水到500ml。 2、0.5mol/l EDTA（pH 8.0）原液的配制 EDTA（乙二胺四乙酸，Ethylenediamine traceticacid.AR）， 分子量为：292.24g，分子式：C10H16O8N2。 称取0.5mol/l×250 ml×292.24g=36.43g EDTA，加少量双蒸水，用碱调节pH 到8.0，溶解后加水定容到250 ml。 3、10%SDS 原液的配制（100 ml） 称取10g SDS粉末，加水定容到100 ml，灭菌备用。 4、5×TBE（5倍体积的TBE贮存液） 配1000ml 5×TBE： Tris 54g 硼酸 27.5g 0.5mol/l EDTA 20ml（pH 8.0） 5、凝胶加样缓冲液（6×） 溴酚蓝 0.25% 蔗糖 40% 仪器的使用 1、高压灭菌锅 高压灭菌锅使用技巧 一．不能使用此高压蒸汽灭菌器消毒任何有破坏性材料和含碱金属成份的物质。消毒这些物品将会导致爆炸或腐蚀内胆和内部管道，以及破坏垫圈。 二．含有盐分的液体漏出或溢出时，一定要及时擦干净，沿着盖子的密封圈要彻底擦干，否则会腐蚀容器和管道。 三．在打开盖子前，确认压力已归于“0/npa”以下。 四．绝对不许擅自改造这个产品。 五．不要在爆炸性气体附近使用该仪器。 高压蒸汽灭菌法的注意事项： 　　第一，无菌包不宜过大（小于50cm×30cm×30cm），不宜过紧，各包裹间要有间隙，使蒸汽能对流易渗透到包裹中央。消毒前，打开贮槽或盒的通气孔，