知母须根总皂苷提取工艺的优化及其对糖氧剥夺-天津中草药杂志社.PDF

中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第49 卷 第13 期 2018 年7 月 ·3087 · 知母须根总皂苷提取工艺的优化及其对糖氧剥夺损伤的PC12 细胞保护作 用研究 * 李丽丽，黄 琪，彭代银 ，吴德玲，韩 岚 安徽中医药大学药学院 安徽省中药研究与开发重点实验室，安徽 合肥 230012 摘 要：目的 优化知母须根总皂苷提取工艺，探讨其对糖氧剥夺 （oxygen-glucose deprivation ，OGD ）损伤的PC12 细胞的 保护作用。方法 在单因素实验基础上，利用响应面法优化知母须根总皂苷提取工艺；建立OGD 损伤的PC12 细胞模型， 采用终质量浓度为20 、40 、80 mg/L 的知母须根总皂苷进行干预。分别用倒置显微镜观察细胞形态，MTT 法测定细胞存活 率，荧光探针二氯荧光素-双乙酸盐 （DCF-DA ）法测定细胞内活性氧 （ROS ）含量，AnnexinV/PI 双染法测定细胞凋亡率， 蛋白免疫印记法检测凋亡信号蛋白Bcl-2 、Bax 表达情况。结果 知母须根总皂苷提取的最优条件为乙醇体积分数72.22% ， 料液比1 ∶11，提取时间73.33 min ，在此条件下，理论提取率为8.38% ，实测提取率为8.33% 。PC12 细胞经OGD 损伤4 h 后细胞活力显著降低，知母须根总皂苷对其呈现保护作用，并随着知母须根总皂苷质量浓度的升高而增强；流式细胞术分析 结果表明知母须根总皂苷能明显减少OGD 损伤PC12 细胞中ROS 含量及凋亡率，免疫印迹实验结果表明知母须根总皂苷可 上调PC12 细胞Bcl-2 表达并下调Bax 表达。结论 通过响应面法优化的工艺得率高、提取效果好。知母须根总皂苷对OGD 损伤的PC12 细胞具有一定的保护作用，其机制可能与减少OGD 诱导PC12 细胞ROS 含量、抑制线粒体凋亡通路有关。 关键词：知母须根；总皂苷；响应面优化；PC12 细胞；OGD 损伤；细胞凋亡 中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2018) 13 - 3087 - 08 DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2018. 13.020 Optimization of extraction process for total saponins from fibrous root of Anemarrhena asphodeloides and its protective effect on PC12 cells induced by oxygen-glucose deprivation LI Li-li, HUANG Qi, PENG Dai-yin, WU De-ling, HAN Lan Anhui Key Laboratory of Research and Development of Traditional Chinese Medicine, College of Pharmacy, Anhui University of Chinese Medicine, Hefei 230012, China Abstract: Objective To optimize the extraction of total saponins from fibrous root of Anemarrhena asphodeloides (TSFAA) and explore its protective effect on PC12 cells induced by oxygen-glucose deprivation (OGD). Methods Single factor experiment and Box-Benhken response surface method were used to select the best extraction technology. The model of PC12 cells induced by OGD was established and treated with the total concentration of 20, 40, and 80 mg/L TSFAA. Inverted microscope was used to observe the