亲和色谱仿生配基的筛选和设计中国科技论文在线.PDFVIP

中国科技论文在线 第 33卷 分析化学 ( FENX I HUAXU E) 　评述与进展 第 9期 　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　 2005年 9 月 Ch ine se Journal of Analytical Chem istry 1345～1349 亲和色谱仿生配基的筛选和设计 任 　军 　贾凌云 (大连理工大学环境与生命学院生物科学与工程系 ,大连 116023) 摘 　要 　利用选择性好 、稳定性高 、价格低廉的仿生配基作为亲和色谱的功能基团 ,实现对 目的蛋白质的亲和 分离 ,可以弥补常规的单克隆抗体和其他天然蛋白质配基在价格 、稳定性方面的不足 ,从而拓展亲和色谱技术 的应用范围。本文综述了亲和色谱仿生配基在筛选和设计方面的研究进展 ,重点介绍了组合方法和基于结构 的仿生配基的设计及其应用 。 关键词 　亲和色谱 ,仿生配基 ,组合化学 ,合理性配基设计 1　引　　言 ( ) 基于分子识别原理的亲和色谱 affin ity chrom atograp hy , AC ,常被描述为在蛋白质纯化技术中效率 和选择性最高的分离方法 [ 1 ] 。在实验室规模 ,经常有 目标蛋白纯度增加超过 1000 倍 ,收率接近 100% 的报道 。使用亲和色谱 ,可以大大简化蛋白质纯化过程的操作步骤 ,提高产品质量和生产强度 、降低生 [ 2 ] ( ) 产成本 。目前该技术还没有在工业规模得到广泛应用 ,主要原因在于 : 1 生物亲和配基的来源困 难 、价格昂贵 。亲和色谱主要由载体和配基组成 ,配基的性质和密度决定了亲和色谱的选择性和吸附容 ( ) 量 。传统的亲和配基多为高纯度的单克隆抗体或其他生物来源的分子 如凝集素 ,辅酶等 ,其生产 、纯 ( ) 化过程同样需要复杂的生物工程步骤 ,制备成本很高 。 2 生物亲和配基的理化性质受环境影响较大 , 容易失去活性 ,对运输 、保存及操作条件的要求苛刻 。 亲和纯化的关键在于能否获得合适的配基 。在理想情况下 ,亲和配基应与 目标蛋白可逆结合 ,并具 有足够的亲和力和选择性 ,易于制备 ,易于固定到层析介质表面 ,对操作条件表现出足够的生物和化学 稳定性 ,不易被降解 ,不易脱落造成产品污染 。生物来源的蛋白质配基虽然具备较强的特异性 ,但是成 本高 、不稳定的缺点在很大程度上限制了亲和色谱的应用范围。因此 ,寻找和制备具有与生物亲和配基 相似活性的人工合成的小分子化合物 ,并取而代之 , 已成为克服生物亲和配基缺陷的重要途径 。仿生配 基的研究的初期阶段是利用常见的基团特异性化合物作为仿生配基 。其中 ,最具代表性的是金属螯合 物类 [ 3 ]和活性染料类配基 [ 4 , 5 ] 。目前 , 以螯合金属和三嗪染料为配基的亲和色谱填料已经商品化 。在 这一阶段 ,人们对仿生配基的选择和利用仅仅基于一般的经验 ,得到有价值的配基数量少 、选择性差 ,无 法适应越来越多全新蛋白质分离分析的需要 。自 20 世纪 80 年代中后期以来 ,随着组合化学和高通量 筛选技术的快速发展 ,仿生配基的研究进入到快速发展阶段 。研究者们尝试用不同的方式建立分子文 库 ,针对 目标产品进行组合筛选 [ 6 ] ,通过 目标明确的大量实验