蛋白质组学技术在环境内分泌干扰物分析上应用-中国科技论文在线.PDF

中国科技论文在线 第31卷 第 8期 I不诧尉 教求 V01．31 NO．8 2008年8月 EnvironmentalScience＆ Technology Aug． 2008 蛋白质组学技术在环境内分泌干扰物分析上应用 王宇 ， 袁涛p， 程金平 ， HUJiang—yong， 王文华 (1．上海交通大学环境科学与T程学院，上海 200240； 2新加坡国立大学环境科学与工程系，新加坡 119260) 摘 要：为了探讨蛋白质组学技术在环境雌激素分析上的应用，用浓度为3．7xlO~molL／的 l7一雌二醇 (E2)处理MCF-7细胞2或 3天后进行双向电泳，对比不同的蛋白质提取、染色方法，利用光密度扫描仪将电泳图像数字化 ，并使用PDQuest软件进行图像分析，以 观察雌激素诱导下的蛋白质表达图谱。结果表明，在蛋白质的提取上，冻融法比超声裂解法更有效；在蛋白质染色上，银染法比考马斯亮 蓝染色法能得到更多可显示的蛋白质斑点。用E2处理 72h后的MCF一7细胞，可检测到4o个下调蛋白和 5个上调蛋白。该蛋白质表达 模式的改变提示了环境雌激素诱导下的特异性蛋白质表达图谱变化。本研究为分析雌激素类内分泌干扰物的内在作用机制提供了一 种新的可行方法，也为建立其高通量筛选方法提供了新的思路。 关键词：内分泌干扰物； 环境雌激素； 蛋白质组学； 蛋白质表达图谱；MCF-7细胞 中图分类号：X172 文献标志码 ：A 文章编号：1003—6504(2008)08—0011-04 ApplicationofProteomicTechnologytoAnalysisofEndocrineDisruptors W ANG Yu， YUAN Tao ， CHENG Jin-ping， HU Jiang-yong ， WANGW en-hua (1．SchoolofEnvironmentalScienceandEngineering，ShanghaiJiaotongUniversity，Shanghai200240，China； 2．DivisionofEnvironmentalScienceandEngineering，NationalUniversityofSingapore．Singapore119260) Abstract：ThisstudywasaimedtOinvestigateenv~onmenmlestrogensbyproteomicstechnologies．Theproteinexpression patternswereexploredusing2-dimensional (2-D)gelelectrophoresis．Estrogeninducingproteinexpressionprofileswere obtainedbytreatingMCF-7cellwith17beta—estradiol (E2)ataconcentrationof3．7xl0mol／Lfortwoorthreedays．Th e protocolsforcytosolproteinextractionandgelstainingmethodswereevaluated．2-D gelswerescannedbyDensitometerand imageanalysiswasperformedbyPDQuestsoftware (Bio—Rad)．Resultsshowedthatfreeze-thawmethodwasmuchmore efficientthan sonication method in term sofprotein extra