弓形虫GRA7致密颗粒蛋白的全基因原核重组表达-中国病原生物学杂志.DOCVIP

刚地弓形虫致密颗粒蛋白GRA2的 全基因原核重组表达 黄敏君1,2 薛峰1,2 洪彩玲1 孙岚1,2 甘绍伯1,2 谷俊朝1,2* 1、首都医科大学附属北京友谊医院，北京热带医学研究所, 北京 100050 2、热带病防治研究北京市重点实验室，北京 100050 【摘要】 目的 克隆弓形虫RH株致密颗粒蛋白2 (GRA2)的全长基因，在大肠杆菌工程菌中重组表达GST-His-GRA2融合蛋白。 方法 提取弓形虫总RNA，反转录获得cDNA，PCR扩增GRA2 基因全长，与pET-41 Ek/LIC载体通过基因重组直接连接,在大肠杆菌RosettaTM (DE3) pLysS工程菌中诱导表达重组融合蛋白，最后采用SDS和Western blotting鉴定重组蛋白产物。 结果 构建了弓形虫GRA2全基因的重组表达质粒，诱导表达了GST-His-GRA2融合重组蛋白，分子量为52kD，与预测结果相符。 结论 本研究获得了弓形虫GRA2全基因的重组蛋白，为下一步研究弓形虫GRA2与宿主细胞的互作奠定基础。 【关键词】 刚地弓形虫；致密颗粒蛋白GRA2；反转录基因克隆；原核表达 资助：国家自然科学基金面上项目；北京市自然科学基金面上项目（7132042）；首都医科大学基础-临床科研合作基金项目（13JL16）；首都医科大学附属北京友谊医院科研启动基金项目（2011_30yykyqd）。 【第一作者】黄敏君 （1955-）,女，北京人，副主任技师。主要从事病原生物学研究。 手机 Email: HYPERLINK mailto:hminjun@126.com hminjun@126.com 地址：首都医科大学附属北京友谊医院 北京热带医学研究所 北京市西城区永安路95号 北京友谊医院2号楼寄生虫科研室 【通讯作者】谷俊朝，Email： HYPERLINK mailto:gujunchao668@163.com。手机gujunchao668@163.com。手机地址：首都医科大学附属北京友谊医院 北京热带医学研究所 北京市西城区永安路95号 北京友谊医院2号楼寄生虫科研室 Cloning and prokaryotic expression of the full-length GRA2 gene of Toxoplasma gondii Huang Min-jun 1,2, Xue Feng 1,2, Hong Cai-ling 1, Sun Lan1,2, Gan Shao-bo1,2, Gun Jun-chao 1,2* Beijing Friendship Hospital, Capital Medical University, Beijing Tropical Medicine Research Institute, Beijing, 100050, China Beijing Key Laboratory for Research on Prevention and Treatment of Tropical Diseases, Beijing, 100050, China 【Abstract】 Objectives The total length of GRA2 gene of Toxoplasma gondii strain RH was cloned and expressed in E.coli to produce GST-His-GRA2 recombinant fusion protein. Methods The cDNA were synthetized from the total RNA of Toxoplasma gondii. The total length of GRA2 was amplified using PCR, and ligated into the pET-41 Ek/LIC vector by direct nucleotide sequence recombination. The recombinant fusion protein was induced in E.coli strain RosettaTM (DE3) pLysS, and analyzed by SDSand Western blotting. Results The recombinant expression plasmid of the GRA2 gene was constructed, and the 56kD GST-His-GRA2 fusion prote