重组大肠杆菌产CotA漆酶的发酵条件优化-应用与环境生物学报.PDFVIP

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2018-11-26 发布于天津
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重组大肠杆菌产CotA漆酶的发酵条件优化-应用与环境生物学报

2011 17 4 ): 563~567 2011-08-25 应用与环境生物学报， ( Chin J Appl Environ Biol=ISSN 1006-687X DOI: 10.3724/SP.J.1145.2011.00563 * 重组大肠杆菌产CotA漆酶的发酵条件优化 ** 张宁汪春蕾赵敏张媛媛（东北林业大学生命科学学院哈尔滨 150040）摘要 CotA漆酶在环境保护、食品工业和纸浆漂白等工业中具有重要的应用价值 . 将重组表达载体pET-22b/CotA转入大肠杆菌 BL21 （DE3 ），得到工程菌株，采用单因素实验和正交实验相结合的方法，研究诱导表达条件和发酵培养 -1 2+ -1 基对重组大肠杆菌产 CotA漆酶量的影响. 结果表明，初始pH 7.5的培养基中，添加0.6 mmol L Cu ，1 g L 葡萄糖作碳 -1 -1 源、15 g L 蛋白胨和2 g L 硫酸铵作氮源，以 10%的接种量，37 ℃、200 r/min ，直到菌液的D600 nm值为 1.0，加入终浓度为 -1 -1 1.0 mmol L 的IPTG ，25 ℃诱导12 h，漆酶的产量最高. 优化前发酵液的粗提液的漆酶活性仅为 1 190 U mLU mL ，优化后达到3 526 U mL-1 ，正交实验优化后漆酶活性提高了2.96倍. 纯化的CotA漆酶最适反应温度为45 ℃，最适，最适pH值为 7.2. CotA 漆酶对RBBRR 的脱色率在90%%以上，此CotA漆酶在短时间内对染料能够有效地脱色，能够成为有潜力的工业用酶 . 图6 表3 参 17 关键词 CotA漆酶；大肠杆菌；重组工程菌；发酵条件优化 CLC TQ925 : Q784 Optimization of Fermentation Conditions of CotA Laccase from Recombinant Escherichia coil *